摘要:
目的 探讨温肾养肝汤保护多巴胺(Dopamine, DA)能神经元, 延缓帕金森病(Parkinson's disease, PD)进程的作用机制。 方法 将50只小鼠随机分为正常组, 模型组, 温肾养肝汤高、低剂量组, 金刚烷胺组, 每组10只, 除正常组外, 其余组小鼠腹腔注射30 mg·kg-1 1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6-四氢吡啶(MPTP), 每周2次, 连续4周, 建立MPTP致小鼠PD模型, 灌胃温肾养肝汤,每日1次,连续3周。观察PD小鼠的行为学变化;免疫组化和尼氏染色法检测DA能神经元细胞数;HPLC法检测病理组织中DA、3, 4-二羟基苯乙酸(3, 4-Dihydroxyphenylacetic acid, DOPAC)和高香草酸(Homovanillic acid, HVA)含量;比色法测定小鼠黑质线粒体中ATP酶(ATPase)、线粒体呼吸链复合物Ⅰ(ComplexⅠ)活性;Western blot测定PINK1、Parkin、VDAC1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白相对表达量。 结果 行为学检测显示, 与模型组相比, 温肾养肝汤能明显改善小鼠的肌肉力量和运动平衡(P < 0.01), 延长小鼠在滚筒上的时间(P < 0.01);免疫组化显示, 温肾养肝汤高剂量组可观察到大量酪氨酸氢化酶(Tyrosine hydrogenase,TH)免疫反应呈阳性的细胞, 明显的细胞突起, 与尼氏染色结果一致, 同时小鼠纹状体中DA和HVA含量明显提高(P < 0.05, P < 0.01);黑质线粒体酶活性和自噬通路相关蛋白研究显示, 高剂量温肾养肝汤能明显提高ATPase和ComplexⅠ活性(P < 0.01), 同时还能上调模型小鼠的PINK1(P < 0.05)、Parkin(P < 0.01)、LC3Ⅱ/Ⅰ(P < 0.01)蛋白表达, 抑制P62蛋白表达(P < 0.01)。 结论 温肾养肝汤通过提高线粒体功能, 激活PINK1/Parkin介导的线粒体自噬过程来保护DA能神经元, 改善PD模型小鼠行为学功能障碍, 延缓PD进程。