摘要:
目的 通过蛋白质组学方法探讨消癌解毒方促进肝癌小鼠肿瘤细胞铁死亡, 抑制移植瘤生长的作用机制。 方法 C57BL/6J小鼠随机分为模型组、消癌解毒方低剂量组、消癌解毒方高剂量组、消癌解毒方联合铁死亡抑制剂组、铁死亡抑制剂组、顺铂组。构建H22小鼠移植瘤模型, 消癌解毒方低、高剂量组予消癌解毒方灌胃, 剂量分别为(10、20 g·kg-1·d-1); 铁死亡抑制剂组予Liproxstatin-1腹腔注射, 剂量为10 mg·kg-1·d-1; 顺铂组予顺铂腹腔注射, 剂量为10 mg·kg-1·d-1; 消癌解毒方联合铁死亡抑制剂组予消癌解毒方(20 g·kg-1·d-1)灌胃以及Liproxstatin-1(10 mg·kg-1·d-1)腹腔注射, 模型组灌胃等量生理盐水。连续给药11 d后剥取瘤体计算抑瘤率；HE染色检测病理变化；透射电镜观察线粒体结构变化；流式细胞术检测瘤体组织活性氧(ROS)水平；制备血清以TMT肽段标记结合LC-MS/MS寻找差异蛋白表达谱、应用IPA软件进行分析；生化检测血清铁离子、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量；Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HMOX1)、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白(SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白表达水平。 结果 消癌解毒方低、高剂量及顺铂能抑制瘤体生长, 抑瘤率分别为36.12%、51.63%、57.43%, 铁死亡抑制剂促进了瘤体的生长, 抑瘤率为-45.56%, 消癌解毒方联合铁死亡抑制剂组瘤体较铁死亡抑制剂组缩小, 抑瘤率为18.11%;HE染色显示消癌解毒方高剂量组、顺铂组瘤体组织出现凋亡细胞及大量空泡蓄积; 透射电镜结果显示, 消癌解毒方低、高剂量组出现一定程度的线粒体萎缩及膜密度增加; 流式结果显示: 消癌解毒方干预后ROS水平明显升高(P < 0.01);蛋白质组学检测显示, 消癌解毒方高剂量组与模型组相比差异蛋白共129个, 其中下调蛋白62个, 上调蛋白67个, 差异表达涉及脂质代谢等方面; 生化检测结果显示, 消癌解毒方干预可升高小鼠血清铁离子、MDA含量, 降低GSH含量; Western blot结果显示, 消癌解毒方高剂量组干预后Nrf2、HMOX1蛋白表达水平增高, SLC7A11、GPX4蛋白表达水平降低(P < 0.01)。 结论 消癌解毒方可调控Nrf2/HMOX1信号通路, 调节氧化应激, 升高脂质过氧化水平, 促进肝癌细胞铁死亡, 可能是其抑制移植瘤生长的作用机制之一。
