摘要:
目的 探讨黄芪-莪术-重楼配伍对巨噬细胞极化的影响及其抑制结直肠癌细胞增殖、迁移的作用机制。 方法 使用佛波酯(Phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)和白细胞介素-4(Interleukin-4, IL-4)刺激THP-1细胞建立M2型巨噬细胞极化模型。实验分为M0组(PMA处理)、M2组(PMA+IL-4处理)、M2+黄芪-莪术-重楼组(PMA+IL-4+黄芪-莪术-重楼配伍处理)。CCK-8检测黄芪-莪术-重楼配伍冻干粉对巨噬细胞活力影响; qPCR和Western blot检测巨噬细胞极化标志物、谷氨酰胺酶(Glutaminase, GLS)mRNA和蛋白表达; ELISA检测细胞上清白细胞介素-10(Interleukin-10, IL-10)、转化生长因子-β(Transforming growth factor-β, TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α, TNF-α)含量; CCK-8和Transwell实验检测黄芪-莪术-重楼配伍干预巨噬细胞的培养上清, 即条件培养基(Conditioned medium, CM), 对结直肠癌细胞HCT116增殖和迁移能力影响。 结果 与M0组相比, M2组IL-10、甘露糖受体(Mannose receptor, CD206)、精氨酸酶1(Arginase 1, ARG1)、GLS mRNA和蛋白表达显著升高(P＜0.01, P＜0.001), 巨噬细胞分泌IL-10、TGF-β水平显著升高(P＜0.01, P＜0.001);与M2组相比, M2+黄芪-莪术-重楼配伍组IL-10、CD206、ARG1、GLS mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.05, P＜0.01), TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase, iNOS) mRNA和蛋白表达显著升高(P＜0.05, P＜0.01，P＜0.001), 白细胞介素-1β(Interleukin-1β, IL-1β) mRNA表达水平显著升高(P＜0.01)，细胞上清中IL-10、TGF-β水平显著降低(P＜0.05, P＜0.01), TNF-α水平显著升高(P＜0.01)。CCK-8和Transwell结果显示, 与M0-CM组相比, M2-CM组促进HCT116细胞增殖和迁移(P＜0.01, P＜0.001), M2+黄芪-莪术-重楼-CM组较M2-CM组显著抑制HCT116细胞增殖并使细胞迁移数显著减少(P＜0.01, P＜0.001)。 结论 黄芪-莪术-重楼配伍可通过调控巨噬细胞极化, 抑制结直肠癌细胞增殖、迁移, 其机制可能与谷氨酰胺代谢关键酶GLS表达变化有关。
