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养阴清热方通过下调JAK/STAT信号通路调节Treg/Th17平衡的实验研究

掌琳惠 马元婧 缪蓉 王伟 翁文馨 袁冬平 龙军 孙云霞

掌琳惠, 马元婧, 缪蓉, 王伟, 翁文馨, 袁冬平, 龙军, 孙云霞. 养阴清热方通过下调JAK/STAT信号通路调节Treg/Th17平衡的实验研究[J]. 南京中医药大学学报, 2022, 38(9): 810-818. doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0810
引用本文: 掌琳惠, 马元婧, 缪蓉, 王伟, 翁文馨, 袁冬平, 龙军, 孙云霞. 养阴清热方通过下调JAK/STAT信号通路调节Treg/Th17平衡的实验研究[J]. 南京中医药大学学报, 2022, 38(9): 810-818. doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0810
ZHANG Lin-hui, MA Yuan-jing, MIU Rong, WANG Wei, WENG Wen-xin, YUAN Dong-ping, LONG Jun, SUN Yunxia. Yangyin Qingre Formula Regulates Treg/Th17 Balance by Down-Regulating JAK/STAT Signaling Pathway[J]. Journal of Nanjing University of traditional Chinese Medicine, 2022, 38(9): 810-818. doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0810
Citation: ZHANG Lin-hui, MA Yuan-jing, MIU Rong, WANG Wei, WENG Wen-xin, YUAN Dong-ping, LONG Jun, SUN Yunxia. Yangyin Qingre Formula Regulates Treg/Th17 Balance by Down-Regulating JAK/STAT Signaling Pathway[J]. Journal of Nanjing University of traditional Chinese Medicine, 2022, 38(9): 810-818. doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0810

养阴清热方通过下调JAK/STAT信号通路调节Treg/Th17平衡的实验研究

doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0810
基金项目: 

国家自然科学基金面上项目 81973823

国家自然科学基金面上项目 81573929

国家自然科学基金青年科学基金项目 81904236

江苏省实验动物协会科研课题 DWXH201916

详细信息
    作者简介:

    掌琳惠, 女, 硕士研究生, E-mail: zlh19960315@163.com

    通讯作者:

    龙军, 男, 教授, 主要从事毒理学的研究, E-mail: longjun@njucm.edu.cn

    孙云霞, 女, 主任医师, 主要从事心血管药理学的研究, E-mail: 13951988997@139.com

  • 中图分类号: R285.5

Yangyin Qingre Formula Regulates Treg/Th17 Balance by Down-Regulating JAK/STAT Signaling Pathway

  • 摘要:   目的  研究养阴清热方(YHF)对脂多糖(LPS)导致的小鼠Treg/Th17失衡的影响及机制。  方法  磁珠分选法提取小鼠脾脏CD4+ T细胞, 用LPS刺激CD4+ T细胞, 再以1、2、4 mg · mL-1的YHF水提液分别进行干预。MTT法检测细胞增殖情况; 流式细胞术检测CD4+ T细胞亚群Treg/Th17比例; ELISA法检测细胞上清中细胞因子IL-10、TGF-β、IL-6、IL-12p70的含量; 蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中Foxp3、RORγt及信号分子JAK/STAT的表达。  结果  HPLC检测鉴定出YHF水提液中8种有效成分, 分别为羟基红花黄色素A、虎杖苷、芦丁、2, 3, 5, 4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷、白藜芦醇、槲皮素、大黄素和姜黄素。YHF水提液可以剂量依赖性地抑制LPS刺激的小鼠CD4+ T细胞的增殖(P < 0.05), 增加Treg的比例(P < 0.05), 降低Th17的比例(P < 0.01), 促进培养上清中Treg相关的抗炎因子IL-10和TGF-β的分泌, 抑制Th17相关的致炎因子IL-6和IL-12p70的分泌。1、2、4 mg · mL-1 YHF均能增加Foxp3蛋白的表达(P < 0.05), 减少RORγt蛋白的表达(P < 0.01)。1、2、4 mg · mL-1 YHF均能降低JAK2、STAT3及其磷酸化蛋白的表达(P < 0.05)。4 mg · mL-1 YHF与JAK2特异性抑制剂AG490联用可以增加培养上清IL-10和TGF-β含量(P < 0.05), 降低IL-6和IL-12p70含量(P < 0.05), 而且可以显著降低p-JAK2、p-STAT3和RORγt蛋白表达(P < 0.01,P < 0.001), 增加Foxp3蛋白表达(P < 0.01)。  结论  YHF可以有效抑制LPS诱导的小鼠CD4+ T细胞增殖, 通过抑制JAK2和STAT3信号分子表达, 增加Foxp3的表达和Treg数量, 减少RORγt的表达和Th17数量, 调节Treg/Th17平衡及抗炎细胞因子和促炎细胞因子的分泌。

     

  • 图  1  YHP水提液有效成分的HPLC色谱图

    注: A.407 nm; B.320 nm; C.350 nm; D.320 nm; E.320 nm; F.365 nm; G.254 nm; H.375 nm; 1.红花黄色素; 2.虎杖苷; 3.芦丁; 4.2, 3, 5, 4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷; 5.白藜芦醇; 6.槲皮素; 7.大黄素; 8.姜黄素

    Figure  1.  HPLC chromatogram of active ingredients of YHP extract

    图  2  YHF对LPS诱导的CD4+ T细胞增殖的影响

    注: 与空白对照组(CD3/CD28)比较, * *P < 0.01, * * *P < 0.001;与LPS组比较, #P < 0.05。x±sn=5。

    Figure  2.  Effects of YHF on proliferation of CD4+ T cells induced by LPS

    图  3  YHF对LPS刺激的CD4+ T细胞中Treg和Th17比例的影响

    注: 与空白对照组(CD3/CD28)比较, *P < 0.05, * *P < 0.01;与LPS组比较, #P < 0.05, ##P < 0.01。x±sn=3。

    Figure  3.  Effects of YHF on the proportion of Treg and Th17 in CD4+ T cells stimulated by LPS

    图  4  YHF对CD4+ T细胞上清液中IL-10、TGF-β、IL-6、IL-12p70含量的影响

    注: 与空白对照组(CD3/CD28)比较, *P < 0.05;与LPS组比较, #P < 0.05。x±sn=5。

    Figure  4.  Effects of YHF on the content of IL-10, TGF-β, IL-6 and IL-12p70 in the supernatant of CD4+ T cells

    图  5  YHF对LPS刺激的CD4+ T细胞的Foxp3和RORγt蛋白表达的影响

    注: 与空白对照组(CD3/CD28)比较, *P < 0.05;与LPS组比较, #P < 0.05, ##P < 0.01。x±sn=3。

    Figure  5.  Effects of YHF on the expression of Foxp3 and RORγt in CD4+ T cells stimulated by LPS

    图  6  YHF对LPS刺激的CD4+ T细胞JAK2和STAT3蛋白表达的影响

    注: 与空白对照组(CD3/CD28)比较, * *P < 0.01;与LPS组比较, #P < 0.05, ##P < 0.01。x±sn=3。

    Figure  6.  Effects of YHF on the expression of JAK2 and STAT3 in CD4+ T cells stimulated by LPS

    图  7  YHF对LPS刺激的CD4+ T细胞p-JAK2和p-STAT3蛋白表达的影响

    注: 与空白对照组(CD3/CD28)比较, *P < 0.05, * *P < 0.01;与LPS组比较, #P < 0.05, ##P < 0.01, ###P < 0.001;与YHF组比较, ΔΔP < 0.01。x±sn=3。

    Figure  7.  Effects of YHF on the expression of p-JAK2 and p-STAT3 in CD4+ T cells stimulated by LPS

    图  8  YHF对CD4+ T细胞上清液中IL-10、TGF-β、IL-6、IL-12p70含量的影响

    注: 与空白对照组(CD3/CD28)比较, *P < 0.05;与LPS组比较, #P < 0.05, ##P < 0.01。x±sn=5。

    Figure  8.  Effects of YHF on the contents of IL-10, TGF-β, IL-6 and IL-12p70 in the supernatant of CD4+ T cells

    表  1  YHP水提液中8种有效成分含量

    Table  1.   The content of active ingredients in YHP extract

    有效成分 含量/(mg·mL-1) 百分含量/%
    羟基红花黄色素A 13.65 0.76
    虎杖苷 27.53 1.53
    芦丁 11.71 0.65
    2, 3, 5, 4'-四羟基二苯乙烯葡萄糖苷 5.14 0.29
    白藜芦醇 0.29 0.02
    槲皮素 1.64 0.09
    大黄素 16.27 0.90
    姜黄素 0.18 0.01
    注:含量表示有效成分在水提液中的浓度, 百分含量表示有效成分在生药中的含量。
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-06-20
  • 网络出版日期:  2022-09-19
  • 发布日期:  2022-09-10

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