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雷公藤多苷片抗人急性单核细胞白血病的物质基础研究

方冰倩 王亚楠 刘琰 王吓长 康迪 胡立宏

方冰倩, 王亚楠, 刘琰, 王吓长, 康迪, 胡立宏. 雷公藤多苷片抗人急性单核细胞白血病的物质基础研究[J]. 南京中医药大学学报, 2022, 38(9): 748-760. doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0748
引用本文: 方冰倩, 王亚楠, 刘琰, 王吓长, 康迪, 胡立宏. 雷公藤多苷片抗人急性单核细胞白血病的物质基础研究[J]. 南京中医药大学学报, 2022, 38(9): 748-760. doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0748
FANG Bing-qian, WANG Ya-nan, LIU Yan, WANG Xia-chang, KANG Di, HU Li-hong. Study on the Material Base of Tripterygium Glycosides Tablet against Human Acute Monocytic Leukemia[J]. Journal of Nanjing University of traditional Chinese Medicine, 2022, 38(9): 748-760. doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0748
Citation: FANG Bing-qian, WANG Ya-nan, LIU Yan, WANG Xia-chang, KANG Di, HU Li-hong. Study on the Material Base of Tripterygium Glycosides Tablet against Human Acute Monocytic Leukemia[J]. Journal of Nanjing University of traditional Chinese Medicine, 2022, 38(9): 748-760. doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0748

雷公藤多苷片抗人急性单核细胞白血病的物质基础研究

doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2022.0748
基金项目: 

国家重点研发计划 2018YFC1707900

国家自然科学基金青年科学基金项目 82104270

江苏省研究生实践创新计划项目 KYCX22_2035

详细信息
    作者简介:

    方冰倩, 女, 硕士研究生, E-mail: 20200634@njucm.edu.cn

    胡立宏,1969年生,男,浙江淳安人,研究员,国家杰出青年科学基金获得者,国家百千万人才、中国科学院百人计划入选者。长期从事基于中药量丰成分和老药的药物发现研究,研发的新型FLT3抑制剂XY0206正在进行临床研究。其领衔的“量丰天然产物应用基础研究”团队入选江苏省高等学校优秀科技创新团队、省双创团队。曾获国家科技进步二等奖、上海市科技进步一等奖、江苏省研究生教育改革成果奖二等奖

    通讯作者:

    胡立宏, 男, 教授, 主要从事中药药效物质基础的发现以及成药性优化研究, E-mail: lhhu@njucm.edu.cn

    康迪, 女, 讲师, 主要从事肿瘤药理学研究, E-mail: kangdi@njucm.edu.cn

  • 中图分类号: R285.5

Study on the Material Base of Tripterygium Glycosides Tablet against Human Acute Monocytic Leukemia

  • 摘要:   目的  发现雷公藤多苷片抗不同亚型血液肿瘤的敏感细胞株及其对敏感细胞株增殖抑制作用的物质基础。  方法  利用CCK-8法检测雷公藤多苷片及其提取物体外对肿瘤细胞增殖的影响; 构建敏感瘤株的体内异种移植瘤动物模型考察雷公藤多苷片对肿瘤细胞的抑制作用; 采用色谱分离技术对雷公藤多苷片提取物进行系统分离, 综合质谱和核磁共振数据鉴定化合物结构, 并考察单体化合物抗人急性单核细胞白血病(Acute monocytic leukemia, AMOL)活性; 进一步通过制备液相定向敲除雷公藤多苷片及其提取物中的雷公藤甲素(Triptolide, TP), 考察敲除TP前后雷公藤多苷片及其提取物的抗AMOL活性。  结果  细胞实验结果表明雷公藤多苷片有较强的抗AMOL活性; 体内异种移植瘤实验结果表明雷公藤多苷片可明显抑制AMOL细胞皮下异种移植瘤的生长; 进一步对雷公藤多苷片提取物进行系统分离及其细胞水平上的活性评价, 发现二萜类化合物TP抗AMOL活性最强; 定向敲除TP后的雷公藤多苷片及其提取物对AMOL细胞MV-4-11的IC50值分别升高8及13倍。  结论  雷公藤多苷片对AMOL细胞具有显著的抗白血病效应, 其中TP是其发挥药效的物质基础。

     

  • 图  1  雷公藤多苷片(浙江得恩德制药股份有限公司)抑制MV-4-11细胞皮下异种移植瘤的生长

    注:与对照组比较,*P < 0.05,**P < 0.01, ***P < 0.001。

    Figure  1.  Tripterygium glycosides tablet (Deende) inhibits the growth of subcutaneous xenografts of MV-4-11 cells

    图  2  TP和Cel的化学结构及对MV-4-11细胞的增殖抑制作用

    Figure  2.  The chemical structures of TP and Cel and their inhibitory effects on the proliferation against MV-4-11 cells

    图  3  TP对HK2和L02细胞的抑制作用

    Figure  3.  The inhibitory effects of TP against HK2 and L02 cells

    表  1  TP定向敲除色谱条件

    Table  1.   TP directional knock-out chromatographic conditions

    时间/min 流动相A/% 流动相B/%
    0 65 35
    40 30 70
    41 0 100
    45 0 100
    46 65 35
    50 65 35
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    表  2  雷公藤多苷片提取物作用于不同肿瘤细胞系48 h的IC50值(x±sn=3)

    Table  2.   IC50 values of tripterygium glycosides extract against different tumor cell lines for 48 h (x±s, n=3)

    细胞系名称 细胞系类型 雷公藤提取物/(μg·mL-1)
    SHI-1 AMOL细胞 1.69±0.01
    MV-4-11 AMOL细胞 2.10±0.02
    Kasumi-1 人急性原粒细胞白血病细胞 4.17±0.07
    SU-DHL-10 人B细胞淋巴瘤细胞 5.18±0.03
    K562 人慢性髓原白血病细胞 5.57±0.03
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    表  3  不同厂家雷公藤多苷片作用MV-4-11细胞48 h的IC50值(x±sn=3)

    Table  3.   IC50 values of tripterygium glycosides tablet from different manufacturers against MV-4-11 cells for 48 h (x±s, n=3)

    雷公藤多苷片 IC50/(μg·mL-1)
    厂家1 3.33±0.01
    厂家2 3.57±0.10
    厂家3 5.64±0.02
    厂家4 5.70±0.03
    厂家5 5.55±0.37
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    表  4  雷公藤多苷片提取物的不同流分对MV-4-11细胞的增殖抑制率(x±s,%, n=3)

    Table  4.   The proliferation inhibition of fraction of tripterygium glycosides extract against MV-4-11 cells for 48 h(x±s, %, n=3)

    流分 25 μg·mL-1 5 μg·mL-1 1 μg·mL-1
    X3 99.92±0.10 92.70±0.08 1.52±3.00
    X4 94.19±0.13 94.59±0.57 11.74±1.61
    X5 96.05±1.06 91.80±0.42 1.45±1.35
    X6 93.62±0.54 92.39±1.05 90.23±1.43
    X7 95.18±0.09 92.49±0.62 89.37±1.38
    X8 91.43±1.05 90.29±0.73 29.71±0.96
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    表  5  化合物1~15对MV-4-11细胞的增殖抑制率(x±s,%, n=3)

    Table  5.   The proliferation inhibition of compounds 1-15 against MV-4-11 cells for 48 h (x±s, %, n=3)

    编号 化合物 25 μg·mL-1 5 μg·mL-1 1 μg·mL-1
    1 雷酚内酯(Triptophnolide) 93.41±0.17 24.61±10.19 5.54±4.13
    2 异雷酚新内酯(Isoneotriptophenolide) 66.54±1.14 -8.94±1.05 -23.48±3.64
    3 雷酚萜醇(Triptonoterpenol) 91.37±1.30 27.67±15.60 12.01±9.58
    4 Triptobenzene J 92.15±3.11 -4.44±6.44 -10.47±4.47
    5 雷公藤甲素(Triptolide) 91.84±0.63 91.46±0.30 88.59±1.02
    6 雷公藤晋碱(Wilforgine) -5.69±8.27 -33.66±12.28 -42.56±16.57
    7 雷公藤定碱(Wilfordine) 16.21±10.07 9.19±11.47 3.28±13.39
    8 雷公藤次碱(Wilforine) 55.09±4.53 17.49±1.24 15.39±0.68
    9 雷公藤春碱(Wilfortrine) 12.77±0.97 9.31±5.95 -22.35±5.76
    10 雷公藤新碱(Euonine) 7.00±1.00 -3.41±8.39 -6.82±2.16
    11 Peritassine A 92.91±0.63 14.66±1.82 0.13±4.12
    12 雷公藤红素(Celastrol) 94.17±0.29 77.40±0.41 73.72±0.29
    13 雷公藤酚A(Wilforol A) 92.54±0.23 34.85±0.08 -22.92±1.38
    14 雷公藤三萜酸A(Triptotriterpenic acid A) 89.65±0.35 2.39±0.27 -30.44±0.06
    15 23-Nor-6-oxodemethylpristimerol 94.06±0.28 18.08±0.96 -52.65±0.20
    16 雷公藤多苷片提取物(Tripterygium glycosides extract) 91.62±0.30 90.24±0.59 23.13±2.83
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    表  6  TP作用于不同肿瘤细胞系48 h的IC50值(x±sn=3)

    Table  6.   IC50 values of TP against different tumor cell lines for 48 h (x±s, n=3)

    细胞系名称 细胞系类型 TP/(ng·mL-1)
    SHI-1 AMOL细胞 1.37±0.11
    MV-4-11 AMOL细胞 3.35±0.03
    Kasumi-1 人急性原粒细胞白血病细胞 3.51±0.26
    SU-DHL-10 人B细胞淋巴瘤细胞 11.41±1.22
    K562 人慢性髓原白血病细胞 13.35±1.05
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    表  7  雷公藤多苷片及其提取物定向敲除TP前后作用MV-4-11细胞48 h的IC50值(x±s,μg·mL-1, n=3)

    Table  7.   IC50 values of tripterygium glycosides tablet and its extract against MV-4-11 cells for 48 h before or after targeted knock-out of TP (x±s, μg·mL-1, n=3)

    雷公藤制剂 去除TP前 去除TP后
    雷公藤多苷片(美通) 3.57±0.10 28.91±0.02
    雷公藤多苷片提取物 2.10±0.02 28.21±0.22
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出版历程
  • 收稿日期:  2022-07-17
  • 网络出版日期:  2022-09-19
  • 发布日期:  2022-09-10

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