经典名方温胆汤水煎液HPLC指纹图谱与多成分含量测定研究

张琴; 王佳丽; 高喜梅; 陆超颖; 狄留庆

doi:10.14148/j.issn.1672-0482.2021.0930

经典名方温胆汤水煎液HPLC指纹图谱与多成分含量测定研究

doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2021.0930

张琴^1,,
王佳丽^{2, 3},
高喜梅^{2, 3},
陆超颖^{2, 3},
狄留庆^{2, 3, ,}

1.
海安市中医院药学部, 江苏南通 226600
2.
南京中医药大学药学院, 江苏南京 210023
3.
江苏省中药高效给药系统工程技术研究中心, 江苏南京 210023

基金项目:

精华制药集团股份有限公司中药经典方开发研究 2018029

详细信息

作者简介:
张琴, 女, 主管药师, E-mail: 906870621@qq.com

通讯作者:
狄留庆, 男, 教授, 主要从事中药药剂学研究, E-mail: diliuqing@njucm.edu.com

中图分类号: R284
计量
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出版历程
- 收稿日期: 2021-07-29
- 网络出版日期: 2021-12-21
- 刊出日期: 2021-11-10
- 发布日期: 2021-11-15

Study on HPLC Fingerprint and Multi-Component Content Determination of Classical Prescriptions Wendan Decoction

ZHANG Qin^1
,,
WANG Jia-li^{2, 3},
GAO Xi-mei^{2, 3},
LU Chao-ying^{2, 3},
DI Liu-qing^{2, 3
, ,}

1.
Department of Pharmacy, Hai ' an Hospital of Traditional Chinese Medicine, Nantong, 226600, China
2.
School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, 210023, China
3.
Jiangsu Engineering Research Center for Efficient Delivery System of TCM, Nanjing, 210023, China

摘要

摘要: 目的建立经典名方温胆汤水煎液HPLC指纹图谱结合多成分含量测定的方法, 为其质量控制提供参考。方法按照古籍中记载的煎煮方法制备温胆汤水煎液, 采用色谱柱Waters X-Bridge C₁₈(4.6 mm×250 mm, 5 μm), 以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱, 体积流量为1 mL·min^-1, 检测波长为310 nm。建立温胆汤HPLC指纹图谱, 对其特征峰进行归属, 并对其中11种成分进行定量分析。结果建立温胆汤水煎液指纹图谱, 共标定25个共有峰, 并通过对照品指认了其中的11个成分, 各批次样品的相似度均大于0.95。结论建立温胆汤水煎液指纹图谱, 并进行多成分同时测定, 方法简便、准确、重现性好, 适用于温胆汤的质量控制, 可为经典名方等质量评价办法的制定提出一定参考。
- 经典名方 /
- 温胆汤 /
- 指纹图谱 /
- 含量测定 /
- 质量控制
Abstract: OBJECTIVE To establish the HPLC fingerprint and the determination of multi-component content of Wendan Decoction, so as to provide reference for its quality control.METHODS Wendan Decoction was prepared according to the decoction method recorded in ancient books. Using Waters X-Bridge C₁₈column (4.6 mm×250 mm, 5 μm) for gradient elution with acetonitrile -0.1% formic acid aqueous solution, and the volume flow was 1 mL·min^-1, the detection wavelength was 310 nm. The HPLC fingerprint of Wendan Decoction was established, the characteristic peaks were assigned, and 11 components were analyzed quantitatively.RESULTS The fingerprint of Wendan Decoction was established, 25 common peaks were demarcated, and 11 components were identified by reference substance. The similarity of each batch of samples was greater than 0.95.CONCLUSION The method is simple, accurate and reproducible, which can be used for quality control of Wendan Decoction and provide reference for the formulation of quality evaluation methods such as classical prescription.
- classical prescriptions /
- Wendan Decoction /
- fingerprint /
- content determination /
- quality control

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图 1 温胆汤指纹图谱共有峰

注：14.甘草苷；17.芸香柚皮苷；18.柚皮苷；19.橙皮苷；20.新橙皮苷；24.川陈皮素；25.桔皮素；a.柚皮素；b.橙皮素；c.甜橙黄酮；d.3, 5, 6, 7, 8, 3', 4'-七甲氧基黄酮

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图 2 温胆汤指纹图谱叠加图

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图 3 样品(A)与混合对照品(B)HPLC图谱

1.甘草苷；2.芸香柚皮苷；3.柚皮苷; 4.橙皮苷; 5.新橙皮苷; 6.柚皮素; 7.橙皮素; 8.甜橙黄酮; 9.川陈皮素; 10.3, 5, 6, 7, 8, 3', 4'-七甲氧基黄酮; 11.桔皮素

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表 1 药材信息表

编号	半夏产地	半夏批次	竹茹产地	竹茹批次	枳实产地	枳实批次	陈皮产地	陈皮批次	生姜产地	生姜批次	甘草产地	甘草批次
S1	四川荆州	171225	福建建瓯	180402	重庆江津	181105	湖北宜昌	180620	山东安丘	190102	内蒙古王爷地	180415
S2	四川荆州	180110	福建建瓯	180610	重庆江津	181108	湖北宜昌	180311	山东安丘	181225	内蒙古王爷地	180420
S3	四川荆州	180125	福建建瓯	180502	重庆江津	181201	湖北宜昌	180920	山东安丘	190103	内蒙古王爷地	180428
S4	四川荆州	180210	福建建瓯	180416	重庆江津	181015	湖北宜昌	180715	山东安丘	181220	内蒙古王爷地	180512
S5	四川荆州	180225	福建建瓯	180516	重庆江津	181018	湖北宜昌	181010	山东安丘	181228	内蒙古王爷地	180515
S6	江苏南通	180405	福建南平	180710	江西樟树	180610	浙江东阳	1807005	山东昌邑	190102	内蒙古鄂前旗	170906
S7	江苏南通	180420	福建南平	180910	江西樟树	180611	浙江东阳	1809010	山东昌邑	181226	内蒙古鄂前旗	170915
S8	江苏南通	180505	福建南平	180801	江西樟树	180612	浙江东阳	1804011	山东昌邑	181217	内蒙古鄂前旗	170920
S9	江苏南通	180605	福建南平	181101	江西樟树	180613	浙江东阳	180816	山东昌邑	181229	内蒙古鄂前旗	170926
S10	江苏南通	180520	福建南平	181010	江西樟树	180803	浙江东阳	180817	山东昌邑	181222	内蒙古鄂前旗	170930
S11	山东菏泽	180615	浙江嘉兴	180410	江西新干	180620	四川眉山	181010	山东莱芜	190103	内蒙古杭锦旗	170904
S12	山东菏泽	180720	浙江嘉兴	180425	江西新干	180621	四川眉山	181120	山东莱芜	181230	内蒙古杭锦旗	170905
S13	山东菏泽	180715	浙江嘉兴	180325	江西新干	180622	四川眉山	180810	山东莱芜	190101	内蒙古杭锦旗	170907
S14	山东菏泽	180710	浙江嘉兴	180310	江西新干	180612	四川眉山	180915	山东莱芜	181227	内蒙古杭锦旗	170911
S15	山东菏泽	180620	浙江嘉兴	180510	江西新干	180625	四川眉山	181016	山东莱芜	181224	内蒙古杭锦旗	170923

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表 2 精密度考察结果

共有峰号	相对保留时间						RSD/%
共有峰号	1#	2#	3#	4#	5#	6#	RSD/%
1	0.116 9	0.117 2	0.117 6	0.117 9	0.118 9	0.120 9	1.26
2	0.277 0	0.278 2	0.276 5	0.278 7	0.279 3	0.278 9	0.40
3	0.321 0	0.322 1	0.320 0	0.322 4	0.322 5	0.321 7	0.30
4	0.334 5	0.335 2	0.333 5	0.335 7	0.336 5	0.335 2	0.31
5	0.354 0	0.354 9	0.353 0	0.355 2	0.355 4	0.354 1	0.25
6	0.389 6	0.390 6	0.388 6	0.390 7	0.390 6	0.389 5	0.22
7	0.459 6	0.460 8	0.458 6	0.460 5	0.459 7	0.459 2	0.18
8	0.473 8	0.474 8	0.472 7	0.474 1	0.473 0	0.472 6	0.19
9	0.534 6	0.535 7	0.533 5	0.534 4	0.532 9	0.532 9	0.21
10	0.561 8	0.563 0	0.560 8	0.562 0	0.560 1	0.560 3	0.20
11	0.597 7	0.599 0	0.596 5	0.598 9	0.597 5	0.597 4	0.16
12	0.671 8	0.673 2	0.670 9	0.673 0	0.671 4	0.672 0	0.14
13	0.696 4	0.698 0	0.696 0	0.697 1	0.695 0	0.695 9	0.15
14	0.712 1	0.713 5	0.711 4	0.712 8	0.710 8	0.711 9	0.14
15	0.732 0	0.733 4	0.731 1	0.732 4	0.730 5	0.731 6	0.14
16	0.776 2	0.777 4	0.775 6	0.776 7	0.774 8	0.776 1	0.11
17	0.816 4	0.817 3	0.815 6	0.816 8	0.815 2	0.816 1	0.09
18	0.870 8	0.871 4	0.870 3	0.871 5	0.870 2	0.870 7	0.06
19	0.920 9	0.921 1	0.920 6	0.921 4	0.920 5	0.920 6	0.04
20	1	1	1	1	1	1	0
21	1.274 3	1.277 1	1.273 9	1.272 5	1.270 7	1.275 4	0.17
22	1.294 5	1.297 4	1.293 9	1.292 7	1.279 6	1.295 5	0.50
23	1.424 0	1.427 4	1.423 0	1.421 7	1.418 3	1.425 2	0.22
24	1.589 0	1.593 0	1.587 3	1.585 7	1.581 1	1.589 3	0.25
25	1.705 9	1.710 9	1.704 5	1.702 4	1.698 0	1.706 2	0.25

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表 3 稳定性考察结果

共有峰号	相对保留时间						RSD/%
共有峰号	0 h	2 h	4 h	8 h	12 h	24 h	RSD/%
1	0.116 9	0.117 6	0.117 9	0.118 0	0.118 5	0.119 9	0.85
2	0.277 0	0.276 5	0.278 7	0.278 7	0.279 9	0.281 0	0.61
3	0.321 0	0.320 0	0.322 4	0.322 4	0.323 6	0.324 1	0.48
4	0.334 5	0.333 5	0.335 7	0.336 4	0.337 4	0.338 4	0.54
5	0.354 0	0.353 0	0.355 2	0.355 7	0.356 7	0.357 4	0.46
6	0.389 6	0.388 6	0.390 7	0.391 3	0.392 2	0.392 9	0.41
7	0.459 6	0.458 6	0.460 5	0.461 3	0.462 2	0.462 2	0.32
8	0.473 8	0.472 7	0.474 1	0.475 4	0.475 3	0.475 2	0.23
9	0.534 6	0.533 5	0.534 4	0.536 1	0.535 1	0.534 1	0.16
10	0.561 8	0.560 8	0.562 0	0.563 4	0.562 1	0.561 1	0.16
11	0.597 7	0.596 5	0.598 9	0.599 8	0.600 3	0.600 1	0.25
12	0.671 8	0.670 9	0.673 0	0.674 6	0.674 0	0.635 8	2.28
13	0.696 4	0.696 0	0.697 1	0.699 7	0.696 9	0.674 0	1.38
14	0.712 1	0.711 4	0.712 8	0.715 3	0.713 1	0.712 3	0.19
15	0.732 0	0.731 1	0.732 4	0.735 3	0.732 7	0.732 2	0.19
16	0.776 2	0.775 6	0.776 7	0.779 7	0.777 0	0.775 8	0.19
17	0.816 4	0.815 6	0.816 8	0.819 2	0.816 7	0.816 1	0.15
18	0.870 8	0.870 3	0.871 5	0.872 7	0.871 2	0.870 5	0.10
19	0.920 9	0.920 6	0.921 4	0.922 0	0.921 0	0.920 7	0.06
20	1	1	1	1	1	1	0
21	1.274 3	1.273 9	1.272 5	1.283 6	1.274 8	1.274 7	0.31
22	1.294 5	1.293 9	1.292 7	1.304 1	1.294 9	1.294 7	0.32
23	1.424 0	1.423 0	1.421 7	1.434 0	1.424 0	1.422 5	0.32
24	1.589 0	1.587 3	1.585 7	1.599 6	1.588 8	1.584 1	0.34
25	1.705 9	1.704 5	1.702 4	1.717 2	1.706 4	1.700 0	0.35

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表 4 重复性考察结果

共有峰号	相对保留时间						RSD/%
共有峰号	1份	2份	3份	4份	5份	6份	RSD/%
1	0.116 9	0.119 6	0.117 5	0.118 2	0.118 6	0.118 5	0.79
2	0.277 0	0.281 7	0.276 7	0.279 8	0.277 4	0.279 5	0.70
3	0.321 0	0.325 8	0.321 0	0.323 6	0.320 8	0.323 5	0.62
4	0.334 5	0.339 6	0.334 7	0.337 1	0.334 4	0.337 6	0.64
5	0.354 0	0.358 7	0.354 2	0.356 7	0.353 8	0.357 4	0.58
6	0.389 6	0.394 2	0.390 0	0.392 3	0.389 3	0.393 3	0.54
7	0.459 6	0.464 1	0.460 4	0.462 4	0.459 3	0.464 1	0.47
8	0.473 8	0.477 6	0.474 6	0.476 2	0.473 3	0.478 4	0.44
9	0.534 6	0.538 4	0.535 5	0.537 0	0.533 5	0.539 4	0.43
10	0.561 8	0.566 1	0.563 2	0.564 4	0.560 7	0.566 6	0.41
11	0.597 7	0.603 2	0.599 4	0.601 1	0.597 4	0.603 0	0.42
12	0.671 8	0.677 6	0.674 3	0.675 7	0.671 8	0.677 8	0.39
13	0.696 4	0.701 7	0.699 3	0.700 5	0.697 0	0.702 6	0.36
14	0.712 1	0.717 6	0.715 0	0.716 0	0.712 5	0.718 2	0.35
15	0.732 0	0.737 5	0.735 0	0.735 8	0.732 4	0.738 2	0.35
16	0.776 2	0.781 6	0.779 8	0.780 1	0.776 7	0.782 2	0.32
17	0.816 4	0.821 1	0.819 2	0.819 5	0.816 6	0.821 3	0.26
18	0.870 8	0.874 8	0.873 1	0.873 2	0.870 8	0.874 4	0.20
19	0.920 9	0.923 5	0.922 3	0.922 4	0.920 9	0.923 1	0.12
20	1	1	1	1	1	1	0
21	1.274 3	1.284 4	1.282 0	1.283 5	1.277 3	1.289 4	0.42
22	1.294 5	1.305 2	1.302 7	1.304 0	1.297 7	1.310 3	0.43
23	1.424 0	1.435 3	1.433 1	1.433 8	1.426 7	1.440 9	0.43
24	1.589 0	1.601 6	1.599 1	1.599 5	1.591 3	1.608 2	0.44
25	1.705 9	1.719 6	1.717 0	1.717 1	1.708 9	1.727 0	0.44

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表 5 15批温胆汤的相似度评价结果

编号	温胆汤	编号	温胆汤	编号	温胆汤	编号	温胆汤	编号	温胆汤
1	0.992	4	0.972	7	0.973	10	0.986	13	0.976
2	0.983	5	0.980	8	0.984	11	0.978	14	0.980
3	0.985	6	0.987	9	0.975	12	0.957	15	0.976

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表 6 11个成分的回归方程与线性范围

成分	线性方程	r	线性范围/(μg·mL^-1)
甘草苷	y=9 841.8x+7 790.1	0.999 8	5.57~111.44
芸香柚皮苷	y=3 080.7x+10 620	0.999 8	23.44~468.80
柚皮苷	y=3 557.4x+62 688	0.999 7	87.25~1 745.00
橙皮苷	y=3 889.8x+14 598	0.999 7	23.51~470.22
新橙皮苷	y=3 930.4x+26 713	0.999 8	53.73~1 074.59
柚皮素	y=11 526x+2 460	0.999 7	1.56~31.26
橙皮素	y=12 158x+3 522.5	0.999 6	1.40~27.95
甜橙黄酮	y=11 810x+1 797.1	0.999 7	1.38~27.60
川陈皮素	y=17 783x+8 565.3	0.999 7	3.75~75.07
3, 5, 6, 7, 8, 3', 4'-七甲氧基黄酮	y=14 905x+1 033.8	0.999 7	1.34~26.87
桔皮素	y=33 420x+5 614.1	0.999 7	1.50~29.91

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表 7 温胆汤中11个成分含量测定结果(mg·g^-1)

编号	甘草苷	芸香柚皮苷	柚皮苷	橙皮苷	新橙皮苷	柚皮素	橙皮素	甜橙黄酮	川陈皮素	3, 5, 6, 7, 8, 3', 4'-七甲氧基黄酮	桔皮素
1	0.354	0.082	3.033	0.879	5.464	0.008	0.004	0.015	0.221	-	0.041
2	0.263	0.255	2.607	0.882	4.383	-	-	0.024	0.249	-	0.048
3	0.355	0.343	2.132	0.934	6.559	0.008	0.018	0.022	0.224	-	0.045
4	0.451	0.856	3.938	0.928	4.809	0.033	0.006	0.018	0.063	0.020	0.021
5	0.382	0.688	1.840	0.956	6.240	0.025	0.007	0.009	0.029	0.013	0.006
6	0.306	0.571	2.507	0.820	5.196	-	0.001	-	0.029	0.017	0.005
7	0.291	0.781	1.900	1.003	7.301	0.003	0.024	0.009	0.036	0.020	0.008
8	0.340	0.764	2.619	1.007	4.255	-	-	0.010	0.036	0.013	0.007
9	0.327	0.781	1.825	1.041	6.603	0.030	0.006	0.010	0.028	0.010	0.006
10	0.301	0.077	3.175	0.820	4.708	-	0.003	0.013	0.199	-	0.035
11	0.181	0.618	1.899	0.808	6.087	-	0.004	0.009	0.032	0.007	0.006
12	0.403	0.114	3.668	0.881	4.526	0.011	-	0.017	0.314	-	0.083
13	0.375	0.744	2.510	0.916	4.020	-	-	0.010	0.044	0.014	0.010
14	0.210	0.196	2.017	0.761	3.535	-	-	0.021	0.206	-	0.041
15	0.668	0.108	3.582	0.885	4.882	0.016	0.005	0.016	0.221	-	0.041
x±s	0.347±0.113	0.465±0.303	2.617±0.714	0.901±0.080	5.238±1.096	-	-	-	0.129±0.105	-	0.027±0.020

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