山海丹颗粒对勃起功能障碍模型大鼠的疗效及相关作用机制研究

杨春媚; 戴小斌; 郑维维; 钱程; 刘洋; 杨葛俊; 郑孟凯; 陆茵; 王爱云

doi:10.14148/j.issn.1672-0482.2021.0244

山海丹颗粒对勃起功能障碍模型大鼠的疗效及相关作用机制研究

doi: 10.14148/j.issn.1672-0482.2021.0244

杨春媚^{1, 2,},
戴小斌¹,
郑维维^{1, 2},
钱程^{1, 2},
刘洋^{1, 2},
杨葛俊^{1, 2},
郑孟凯³,
陆茵^{1, 2},
王爱云^{1, 2, ,}

1.
南京中医药大学药学院，江苏南京 210023
2.
江苏省中药药效与安全性评价重点实验室，江苏南京 210023
3.
浙江施强制药有限公司，浙江杭州 311508

基金项目:

江苏高校品牌专业建设工程资助项目 TAPP-PPZY2015A070

江苏高校中药学优势学科建设工程 PAPD

详细信息

作者简介:
杨春媚，女，硕士研究生，E-mail：20181373@njucm.edu.cn

通讯作者:
王爱云，女，副教授, 主要从事活血化瘀中药抗肿瘤转移药理研究，E-mail: way9815@163.com

中图分类号: R285.5
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出版历程
- 收稿日期: 2020-10-08
- 网络出版日期: 2021-12-21
- 刊出日期: 2021-03-10
- 发布日期: 2021-03-15

The Curative Effect and Related Mechanism of Shanhaidan Granules on Rats with Erectile Dysfunction

YANG Chun-mei^{1, 2
,},
DAI Xiao-bin¹,
ZHENG Wei-wei^{1, 2},
QIAN Cheng^{1, 2},
LIU Yang^{1, 2},
YANG Ge-jun^{1, 2},
ZHENG Meng-kai³,
LU Yin^{1, 2},
WANG Ai-yun^{1, 2
, ,}

1.
School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing, 210023, China
2.
Jiangsu Key Laboratory for Pharmacology and Safety Evaluation of Chinese Materia Medica, Nanjing, 210023, China
3.
Zhejiang Strong Pharmaceutical Co. Ltd, Hangzhou, 311508, China

摘要

摘要: 目的观察山海丹颗粒对勃起功能障碍(Erectile dysfunction, ED)疾病的改善作用，并基于前期网络药理学分析结果，探讨可能的相关机制。方法选取140只Wistar大鼠作为实验动物，雌雄各半。采用双侧髂内动脉结扎的方法，用雄性大鼠建立血管性ED动物模型，分为正常组、模型组、西地那非组、疏肝益阳胶囊组、山海丹颗粒低剂量组、山海丹颗粒中剂量组、山海丹颗粒高剂量组，给药组灌胃给药8周，正常组和模型组给予等体积的双蒸水。考察各组大鼠性行为学指标，TUNEL染色检测睾丸内生精细胞凋亡情况，Western blot和qPCR检测阴茎组织的iNOS、eNOS、nNOS和p38表达水平。结果和模型组相比，山海丹颗粒显著缩短了ED大鼠的扑捉潜伏期和射精潜伏期，减少睾丸组织内凋亡的生精细胞数量，增加iNOS、eNOS、nNOS表达，抑制p38磷酸化。结论山海丹颗粒可有效改善ED模型大鼠的疾病状态，其治疗ED的作用机制可能是通过调控iNOS、eNOS、nNOS和p38来实现的。
- 勃起功能障碍 /
- 山海丹颗粒 /
- 性行为学 /
- 凋亡 /
- NO /
- p38
Abstract: OBJECTIVE To observe the effect of Shanhaidan Granules on erectile dysfunction (ED) disease, and to explore its possible related mechanisms based on the results of previous network pharmacological analysis. METHODS 140 Wistar rats were selected as experimental animals including 70 male rats and 70 female rats. Male rats were used to establish vascular ED animal models by bilateral internal iliac artery ligation, which were randomly divided into normal group, model group, sildenafil group, Shugan Yiyang capsule group, Shanhaidan granules low-dose group, medium-dose group and high-dose group. The normal group and the model group were given equal volumes of double distilled water. The sexual behavior indexes of rats in each group were investigated weekly. After 8 weeks of gavage, TUNEL staining was used to detect the apoptosis of spermatogenic cells in the testis. Western blot and qPCR were used to detect the expression levels of iNOS, eNOS, nNOS and p38 in penile tissues. RESULTS Compared with the model group, Shanhaidan granules significantly shortened the capture latency and ejaculation latency of ED rats, reduced the number of apoptotic spermatogenic cells in the testicular tissue, increased the expressions of iNOS, eNOS, nNOS, and inhibited p38 phosphorylation. CONCLUSION Shanhaidan granules can effectively improve the disease state of ED model rats, and its mechanism may be partly related to the regulation of iNOS, eNOS, nNOS and p38.
- erectile dysfunction /
- Shanhaidan Granules /
- sexual behavior /
- apoptosis /
- NO /
- p38

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图 1 山海丹颗粒对ED大鼠体质量的影响(x±s, n=10)

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图 2 山海丹颗粒对ED大鼠脏器指数的影响

注：与正常组比较，^##P < 0.01。x±s, n=10。

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图 3 各组大鼠睾丸中生精细胞凋亡情况(TUNEL染色，×400)

注：A.正常组；B.模型组；C.西地那非组；D.疏肝益阳胶囊组；E.山海丹颗粒低剂量组；F.山海丹颗粒中剂量组；G.山海丹颗粒高剂量组; 与正常组比较，^##P < 0.01；与模型组比较，^*P < 0.05, ^**P < 0.01。x±s, n=5。

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图 4 山海丹颗粒对ED大鼠阴茎组织中相关蛋白表达的影响

注：A.正常组；B.模型组；C.山海丹颗粒低剂量组；D.山海丹颗粒中剂量组；E.山海丹颗粒高剂量组; 与正常组比较, ^#P < 0.05, ^##P < 0.01；与模型组比较, ^*P < 0.05, ^**P < 0.01。x±s, n=5。

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图 5 山海丹颗粒对ED大鼠阴茎组织中相关蛋白mRNA水平的影响

注：与正常组比较, ^##P < 0.01；与模型组比较, ^*P < 0.05, ^**P < 0.01。x±s, n=5。

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表 1 APO实验检测大鼠勃起次数(x±s)

组别	n	勃起次数
正常组	10	3.33±0.89
造模组	60	0.83±0.49^##
注：与正常组比较, ^##P < 0.01。

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表 2 山海丹颗粒对ED大鼠扑捉潜伏期的影响(x±s, n=10)

组别	剂量/ [g·(kg·d)^-1]	1周	2周	3周	4周
正常组	-	3.33±0.89	28.4±8.88	26.7±10.36	25.3±8.39
模型组	-	0.75±0.45^##	111.5±50.93^##	98.2±41.54^##	103.8±39.66^##
西地那非组	0.010 5	0.92±0.51^**	34.3±8.59^**	27.2±8.11^**	27.5±12.55^**
疏肝益阳组	0.315	0.92±0.51	66.1±9.16^*	65.8±30.74^*	52.9±14.75^**
山海丹低剂量组	3.15	0.83±0.58	105.1±44.44^△	76.5±20.89	65.8±22.89^**
山海丹中剂量组	6.3	0.83±0.39	94.0±25.28	70.2±16.94	50.4±17.75^**
山海丹高剂量组	12.6	0.75±0.62	80.2±22.78	61.2±19.59^*	41.2±16.70^**

组别	剂量/ [g·(kg·d)^-1]	5周	6周	7周	8周
正常组	-	25.5±9.97	25.8±8.89	26.4±8.41	25.6±8.07
模型组	-	105.2±58.84^##	91.5±36.09^##	113.4±77.19^##	91.8±20.20^##
西地那非组	0.010 5	29.0±10.33^**	32.4±13.23^**	28.7±4.19^**	29.3±10.0^**
疏肝益阳组	0.315	42.0±19.07^**	41.6±14.86^**	37.7±8.60^**	38.2±7.41^**
山海丹低剂量组	3.15	55.1±25.50^**	66.5±16.39^*△	58.3±21.20^**	58.5±19.20^**△△
山海丹中剂量组	6.3	50.7±29.92^**	53.6±8.44^**	48.1±17.90^**	40.5±8.06^**
山海丹高剂量组	12.6	38.8±3.99^**	36.6±15.90^**	38.1±10.89^**	37.3±6.00^**
注：与正常组比较，^##P < 0.01；与模型组比较，^P < 0.05, ^*P < 0.01；与疏肝益阳组比较，^△P < 0.05, ^△△P < 0.01。

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表 3 山海丹颗粒对ED大鼠射精潜伏期的影响(x±s, n=10)

组别	剂量/ [g·(kg·d)^-1]	1周	2周	3周	4周
正常组	-	758.3±126.2	551.8±204.5	675.8±140.4	638.2±108.2
模型组	-	1 032.0±90.26^##	948.2±61.75^##	915.8±89.15^##	905.5±72.85^##
西地那非组	0.010 5	835.9±114.0^**	736.1±119.5^**	757.1±122.6^*	770.5±176.3
疏肝益阳组	0.315	944.8±48.32	859.6±87.26	794.0±142.6	822.9±108.4
山海丹低剂量组	3.15	1 035.0±58.33	927.0±81.18	859.7±77.84	863.8±118.9
山海丹中剂量组	6.3	986.6±22.72	841.1±79.79	814.8±78.87	830.5±134.7
山海丹高剂量组	12.6	954.3±85.00	825.4±108.9	775.7±119.6^*	715.6±181.2^*

组别	剂量/ [g·(kg·d)^-1]	5周	6周	7周	8周
正常组	-	613.6±149.6	708.5±113.2	614.3±177.3	694.8±90.96
模型组	-	909.3±97.19^##	922.0±71.55^##	982.7±64.16^##	942.7±89.73^##
西地那非组	0.010 5	759.7±169.6	760.5±151.6^*	714.4±119.0^**	717.6±110.2^**
疏肝益阳组	0.315	730.2±92.92^**	794.5±102.8^*	805.9±86.86^**	751.8±139.3^**
山海丹低剂量组	3.15	843.1±98.43	838.6±79.57	816.8±131.6^*	865.4±68.76^*
山海丹中剂量组	6.3	787.5±94.35	765.9±88.64^*	792.0±112.2^**	778.9±93.19^*
山海丹高剂量组	12.6	746.7±96.66^*	747.9±99.36^**	702.7±103.9^**	746.4±125.8^**
注：与正常组比较, ^##P < 0.01；与模型组比较, ^P < 0.05, ^*P < 0.01。

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