Study on Quality Control Method of Zhali Nusi Fang by UPLC Fingerprint and Multi-Components Quantitative Analysis
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摘要: 目的 建立扎里奴思方的UPLC-PDA指纹图谱及多成分含量测定方法。方法 采用Waters ACQUITY UHPLC T3(2.1 mm×100 mm，1.7 μm)色谱柱，流动相为乙腈(A)-0.1%甲酸水溶液(B)，梯度洗脱，流速0.4 mL/min，柱温30 ℃，检测波长317 nm；采用UPLC-PDA对其中9种物质进行含量测定。结果 共确定扎里奴思方指纹图谱13个共有色谱峰，通过对照品比对出其中9个共有峰。10批样品指纹图谱相似度为0.923~0.983。9种物质在一定浓度范围内呈良好线性关系，r值均大于0.999 0；含量测定结果表明肉桂酸、没食子酸含量较高。各物质回收率在98.82%~102.91%之间，RSD均小于2.52%；样品在24 h内稳定，重复性良好。结论 建立了扎里奴思方指纹图谱分析方法及含量测定方法，该方法简便、重复性良好，可为进一步完善扎里奴思方质量控制方法提供参考。Abstract: OBJECTIVE To establish the UPLC-PDA fingerprint analysis and multi-components content determination methods of Zhali Nusi Fang.METHODS A Waters ACQUITY UHPLC T3 (2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm) column was used with a gradient elution. The mobile phase was acetonitrile (A)-0.1% formic acid aqueous solution (B), flow rate was 0.4 mL/min, column temperature was 30 ℃, detection wavelength was 317 nm; nine chemical components were determined by UPLC-PDA.RESULTS 13 common peaks were found in the fingerprint of Zhali Nusi Fang and 9 peaks were identified by standard substances. The similarity of fingerprints of 10 batches was between 0.923 and 0.983. The linear relationship of 9 components was good in certain concentration range, and the r value was greater than 0.999 0. The results showed that the contents of cinnamic acid and gallic acid were high. The recoveries ranged from 98.82% to 102.91%, RSD was less than 2.52%. The samples were stable within 24 hours with good repeatability.CONCLUSION The fingerprint analysis method and content determination method of Zhali Nusi Fang are established. The method is simple and repeatable, which can provide reference for further elucidation of the basic research of pharmacodynamic substances and quality control.
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Key words:
- Zhali Nusi Fang /
- fingerprint /
- content determination /
- UPLC
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图 1 对照指纹图谱
注：1.没食子酸; 2.绿原酸; 3.羟基红花黄色素A; 5.阿魏酸; 7.肉桂酸; 8.丹皮酚; 9.朝藿定B; 10.淫羊藿苷; 11.β-细辛醚
表 1 药材具体信息表
编号 药材 批号 产地 基原 1 安息香 5118003
5118004
5118005越南
越南
越南安息香科植物白花树
Styrax tonkinensis (Pierre)
Craibex Hart.的干燥树脂2 乳香 2138003
2138004
2138005埃塞俄比亚
埃塞俄比亚
埃塞俄比亚橄榄科植物乳香树
Boswellia carterii Birdw.
树皮渗出的树脂3 石菖蒲 19818006
19818007
19818008安徽
安徽
江西天南星科植物石菖蒲
Acorus tatarinowii
Schott的干燥根茎4 当归 518039
518040
518041甘肃
甘肃
甘肃伞形科植物当归
Angelica sinensis
(Oliv.)Diels的干燥根5 红花 3319016
3319017
3319018云南
新疆
新疆菊科植物红花
Carthamus tinctorius
L.的干燥花6 杜仲 12818004
12818005
12818006四川
四川
四川杜仲科植物杜仲
Eucommia ulmoides
Oliv.的干燥树皮7 牡丹皮 118017
118018
118019安徽
安徽
安徽毛茛科植物牡丹
Paeonia suffruticosa
Andr.的干燥根皮8 淫羊藿 2318011
2318012
2318013甘肃
甘肃
甘肃小檗科植物淫羊藿
Epimedium brevicomu
Maxim.的干燥叶9 大黄 21518003
21518004
21518005甘肃
甘肃
湖北蓼科植物药用大黄
Rheum officinale
Baill.的干燥根10 怀牛膝 6018006
6018007
6018008河南
河南
河南苋科植物牛膝
Achyranthes bidentata
Bl.的干燥根11 海风藤 2148002
2138004
22018002四川
四川
四川胡椒科植物风藤
Piper kadsura(Choisy)
Ohwi的干燥藤茎12 没药 21418002
21418003
21418004沙特阿拉伯
沙特阿拉伯
沙特阿拉伯橄榄科植物地丁树
Commiphora myrrha
Engl.的干燥树脂
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表 2 10批样品指纹图谱共有峰相对保留时间
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD/% 1 0.109 5 0.109 9 0.109 7 0.109 9 0.110 6 0.110 2 0.110 0 0.110 0 0.109 7 0.109 7 0.28 2 0.461 1 0.467 9 0.480 0 0.463 4 0.465 5 0.459 4 0.466 9 0.462 7 0.463 1 0.461 2 1.26 3 0.552 4 0.555 8 0.543 7 0.545 2 0.556 3 0.555 1 0.555 4 0.553 9 0.554 2 0.553 7 0.80 4 0.711 9 0.711 0 0.712 5 0.713 5 0.711 8 0.710 9 0.710 5 0.712 3 0.712 9 0.711 6 0.13 5 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 0.00 6 1.229 8 1.248 1 1.228 4 1.229 9 1.236 1 1.234 1 1.235 6 1.234 1 1.233 6 1.233 2 0.45 7 1.576 8 1.586 2 1.563 0 1.565 4 1.577 7 1.575 9 1.580 1 1.573 5 1.572 2 1.571 3 0.43 8 1.768 9 1.781 2 1.754 2 1.758 4 1.771 9 1.769 0 1.773 1 1.767 1 1.764 5 1.763 6 0.43 9 2.204 1 2.222 6 2.174 4 2.152 2 2.199 9 2.195 1 2.200 2 2.191 3 2.189 7 2.185 9 0.85 10 2.258 6 2.277 3 2.229 1 2.235 8 2.254 8 2.249 7 2.256 3 2.248 5 2.243 3 2.242 6 0.60 11 2.672 5 2.695 7 2.641 6 2.648 9 2.672 6 2.673 3 2.676 3 2.666 1 2.661 4 2.658 7 0.57 12 2.808 0 2.833 1 2.774 9 2.783 0 2.808 2 2.802 5 2.812 1 2.802 6 2.796 0 2.794 7 0.57 13 3.302 0 3.332 6 3.257 3 3.267 3 3.297 0 3.290 7 3.302 4 3.291 9 3.284 0 3.282 1 0.63
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表 3 10批样品指纹图谱共有峰相对峰面积
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 RSD/% 1 0.958 3 1.254 5 1.229 6 1.325 6 1.107 4 1.353 9 1.269 3 1.146 3 1.156 2 1.239 2 9.64 2 0.268 6 0.464 2 0.562 9 0.295 4 0.515 0 0.388 4 0.610 0 0.541 3 0.589 8 0.692 1 28.02 3 1.504 6 1.735 0 1.705 2 0.751 4 1.725 2 0.910 9 1.701 7 1.797 7 1.216 3 1.683 1 25.72 4 0.953 7 1.264 0 1.364 6 1.355 5 1.229 5 1.377 7 1.188 5 1.228 1 1.316 6 1.186 0 10.07 5 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 1.000 0 0.00 6 0.185 5 0.160 5 0.185 5 0.184 0 0.187 3 0.248 6 0.218 6 0.185 4 0.227 7 0.225 9 13.63 7 3.006 2 2.895 5 2.895 2 2.930 4 3.196 2 3.483 8 3.587 3 3.190 2 3.443 6 3.395 0 8.22 8 1.261 3 1.433 1 0.969 4 0.856 1 1.056 3 1.431 7 1.378 1 1.083 6 1.072 5 1.108 8 17.20 9 0.313 7 0.363 8 0.371 3 0.365 3 0.359 8 0.413 8 0.395 9 0.355 7 0.357 5 0.343 0 7.47 10 1.598 6 1.746 4 1.696 9 1.734 0 1.651 2 2.309 9 2.156 7 1.698 9 1.863 3 1.700 3 12.85 11 0.643 1 0.647 8 0.520 0 0.502 9 0.757 4 1.174 5 1.111 2 0.780 8 0.847 7 0.775 0 28.84 12 0.968 1 1.216 6 1.057 3 1.062 6 0.997 5 1.397 3 0.877 6 1.052 4 1.325 3 0.909 3 15.95 13 0.731 6 0.968 7 1.403 5 1.323 1 1.319 4 1.892 2 1.026 3 1.598 4 2.321 6 1.257 5 33.49
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表 4 9种成分的回归方程和线性范围
化合物 回归方程 r 线性范围/ (μg·mL-1) 没食子酸 Y=2 589.3X+9 807 0.999 5 154.3~1 542 朝藿定B Y=14 704X-16 023 0.999 3 4.700~46.98 淫羊藿苷 Y=20 674X+17 066 0.999 6 17.85~178.5 阿魏酸 Y=61 174X-36 199 0.999 8 2.613~26.13 肉桂酸 Y=4 391.6X-5 464 0.999 6 173.4~1 734 丹皮酚 Y=43 561X-39 539 0.999 1 4.700~46.98 绿原酸 Y=42 309X-29 760 0.999 0 3.096~30.96 羟基红花 Y=6 221X+47 640 0.999 2 122.0~1 220 黄色素A β-细辛醚 Y=15 371X-16 618 0.999 0 10.64~106.4
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表 5 10批样品粉末中9种成分含量测定结果
(mg·g-1) 批次 没食子酸 绿原酸 羟基红花黄色素A 阿魏酸 丹皮酚 肉桂酸 淫羊藿苷 朝藿定B β-细辛醚 S1 4.68 0.09 3.02 0.21 0.38 8.72 0.98 0.28 0.54 S2 5.38 0.13 3.05 0.19 0.37 7.37 0.94 0.28 0.48 S3 5.34 0.16 3.04 0.19 0.26 7.47 0.92 0.29 0.39 S4 5.79 0.09 1.31 0.19 0.23 7.60 0.95 0.29 0.38 S5 5.07 0.15 3.25 0.20 0.30 8.70 0.95 0.30 0.60 S6 5.77 0.11 1.56 0.19 0.37 8.82 1.23 0.32 0.86 S7 5.65 0.17 3.11 0.19 0.37 9.48 1.20 0.32 0.85 S8 5.08 0.15 3.28 0.19 0.29 8.40 0.94 0.29 0.60 S9 5.05 0.16 2.16 0.19 0.29 8.93 1.02 0.29 0.64 S10 5.43 0.19 3.02 0.19 0.30 8.82 0.93 0.27 0.58
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