摘要:
目的 探究半夏有效成分环阿屯醇对小鼠心肌缺血再灌注损伤(Myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI)的影响及作用机制。 方法 在体外实验中, 从1~3日龄的SD雄性大鼠乳鼠上提取原代心肌细胞, 分为对照(Control)组、缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation，H/R)组、环阿屯醇低剂量组(3 μmol·L-1)、环阿屯醇高剂量组(10 μmol·L-1)和SB203580组。各组预给药干预后，在缺氧培养箱中缺氧培养3 h, 正常培养箱中复氧培养3 h复制缺氧/复氧模型。利用CCK-8检测各组心肌细胞活力, 流式法检测细胞凋亡率, Western blot检测p38 MAPK、p-p38 MAPK的表达水平。在体内实验中, 将7周龄的雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照(Control)组, 缺血/再灌注损伤(Ischemia/Reperfusion, I/R)组, 环阿屯醇低、中、高(0.2、0.5、1.0 mg·kg-1)剂量组。手术前7 d连续给药, 通过小鼠心脏冠状动脉左前降支(Left anterior descending artery, LAD)结扎30 min, 再灌注24 h的方式制备MIRI模型。小动物超声心动图检测左心室射血分数(Left ventricular ejection fraction, LVEF)、小鼠心输出量(Cardiac output, CO)、左室缩短分数(Left ventricular fractional shortening, LVFS); TTC染色法检测各组小鼠心脏的缺血梗死面积的变化; HE染色法观察各组小鼠心肌组织的变化; Western blot检测小鼠心肌组织中p38 MAPK、p-p38 MAPK、IL-6及TNF-α的表达水平; ELISA法检测小鼠血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTnI)、细胞白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。 结果 体外实验中, 与H/R组相比, 环阿屯醇预处理组和SB203580组的心肌细胞活力有明显提高(P < 0.05), 细胞凋亡率有所下降(P < 0.05), 可以下调IL-6表达水平(P < 0.01), 降低p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值(P < 0.05, P < 0.01)。体内实验证明, 与I/R组相比, 中、高剂量环阿屯醇预处理可以显著提高LVEF、LVFS及CO值(P < 0.05, P < 0.01), 减少心肌缺血梗死面积(P < 0.05), 提高心肌功能, 有效保护心肌组织纤维, 下调小鼠血清中CK-MB、LDH、cTnI、IL-6和TNF-α水平(P < 0.05)；环阿屯醇高剂量组降低p-p38 MAPK/p38 MAPK的比值(P < 0.05), 减少IL-6和TNF-α的表达水平(P < 0.05)。 结论 环阿屯醇预处理可以保护小鼠心功能, 减轻MIRI, 其作用机制可能与抑制p38 MAPK磷酸化, 减轻炎性反应有关。
