2013, 29(1): 48-52.
摘要:
目的 研究黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变关节软骨IL-1β表达的影响。方法 取膝骨关节炎患者手术后的退变膝关节软骨，进行细胞培养，将培养的软骨细胞分离传代后，取第三代细胞，通过HE、Ⅱ型胶原免疫荧光染色进行软骨细胞鉴定，并进行IL-1β免疫荧光染色。观察软骨细胞退变情况后分为6组（A组：软骨细胞+DMEM对照组；B组：软骨细胞+25 mmol/L黄芪甲苷；C组：软骨细胞+50 mmol/L黄芪甲苷；D组：软骨细胞+75 mmol/L黄芪甲苷；E组：软骨细胞+100 mmol/L黄芪甲苷；F组：软骨细胞+500 mmol/L黄芪甲苷），取4、8、24、48、72 h采用实时荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)检测各组退变软骨细胞内IL-1β mRNA的表达情况。结果 ①形态观察。原代细胞中梭形细胞和多角形细胞并存，细胞核偏于细胞的一侧而贴近细胞膜，细胞纤丝较长。HE染色细胞质为红色，胞膜呈蓝色；甲苯胺蓝染色细胞质和胞膜均呈深蓝色；Ⅱ型胶原染色阳性为绿色荧光，细胞核采用4’，6-二脒基-2-苯基吲哚复染，在不同波段荧光激发下，胞浆和胞膜可见清晰绿色荧光，细胞核区域未见明显绿色荧光，证明培养细胞表达特征性基因Ⅱ型胶原，主要分布在胞浆和细胞膜上，证明所培养的细胞为软骨细胞。IL-1β免疫荧光染色可见清晰绿色荧光，软骨细胞以多角形多见。②IL-1β mRNA表达。不同时间点间软骨细胞IL-1β mRNA表达水平有差异（F=13.236，P<0.01）；不同组间软骨细胞IL-1β mRNA表达水平有差异（F=98.762，P<0.01），A组高于B组、C组、D组、E组（P<0.05~0.01），F组高于A组、B组、C组、D组、E组（P<0.05~0.01）；时间因素和组间因素存在交互效应（F=7.262，P<0.01）。结论 一定浓度的黄芪甲苷能通过抑制退变软骨细胞合成IL-1β，延缓软骨细胞退变；浓度过高则会促进退变软骨细胞合成IL-1β，加速软骨细胞退变。
