经典名方温经汤基准样品HPLC-Q-TOF/MS分析与指纹图谱研究

汤志锋; 张云羽; 石德志; 高武锋; 龚小文; 嵇晶; 黄仕文; 程建明

doi:10.14148/j.issn.1672-0482.2023.0452

经典名方温经汤基准样品HPLC-Q-TOF/MS分析与指纹图谱研究

汤志锋^{1, 2,},
张云羽^{1, 2},
石德志^{1, 2},
高武锋^{1, 2},
龚小文^{1, 2},
嵇晶^{1, 2},
黄仕文^3, ,,
程建明^{1, 2, ,}

1.
南京中医药大学药学院, 江苏南京 210023
2.
江苏省经典名方工程研究中心, 江苏南京 210023
3.
南京中医药大学中医学院·中西医结合学院, 江苏南京 210023

基金项目:

江苏省自然科学基金 BK20181424

详细信息

作者简介:
汤志锋, 男, 硕士研究生, E-mail: 20200839@njucm.edu.cn

通讯作者:
黄仕文, 男, 副教授, 主要从事中药新剂型新技术及其产品开发研究, E-mail: hshw_66@163.com

程建明, 男, 研究员, 主要从事中药新剂型新技术及其产品开发研究, E-mail: cjm@njucm.edu.cn

中图分类号: R284
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出版历程
- 收稿日期: 2022-08-25
- 网络出版日期: 2023-05-18
- 刊出日期: 2023-05-09

Study on HPLC-Q-TOF/MS Analysis and Fingerprint of Classic Prescription Wenjing Decoction Substance Benchmarks

TANG Zhi-feng^{1, 2,},
ZHANG Yun-yu^{1, 2},
SHI De-zhi^{1, 2},
GAO Wu-feng^{1, 2},
GONG Xiao-wen^{1, 2},
JI Jing^{1, 2},
HUANG Shi-wen^3, ,,
CHENG Jian-ming^{1, 2, ,}

1.
School of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China
2.
Jiangsu Province Engineering Research Center of Classical Prescription, Nanjing 210023, China
3.
School of Chinese Medicine, School of Chinese Medicine and Intergrative Medicine, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210023, China

摘要

摘要:
目的采用HPLC-Q-TOF/MS技术对温经汤基准样品化学成分进行表征, 同时建立经典名方温经汤基准样品指纹图谱, 并对其共有峰进行指认与归属。
方法采用Agilent 5 TC-C₁₈(2)柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱, 以乙腈-0.1%甲酸水为流动相进行梯度洗脱, 通过PeakView软件辅助解析, 快速鉴别出温经汤基准样品中化学成分, 并通过HPLC-UV及HPLC-ELSD法建立温经汤基准样品指纹图谱。
结果温经汤基准样品中共分析鉴别出122个化合物, 并进行相关药味归属。建立的温经汤基准样品HPLC-UV指纹图谱有19个共有峰, 通过对照品比对, 指认出没食子酸、芍药苷、甘草酸、甘草苷、桂皮醛、丹皮酚、阿魏酸、藁本内酯、β-蜕皮甾酮9个色谱峰; HPLC-ELSD指纹图谱有8个共有峰, 通过对照品比对, 指认出人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re和人参皂苷Rb₁。建立的HPLC-UV、HPLC-ELSD两张指纹图谱能够归属全方所有药味。
结论通过UV、ELSD建立的指纹图谱方法灵敏度高, 稳定性和准确性良好, 全面反映了温经汤基准样品的整体特征, 为温经汤基准样品质量标准的建立提供了可靠的依据。
- 温经汤 /
- 指纹图谱 /
- HPLC-Q-TOF/MS /
- 化学成分
Abstract:
OBJECTIVE To characterize the chemical composition of the benchmark sample of Wenjing Decoction (WJT) by establishing fingerprints of WJT benchmark sample and conduct the common peaks identification and attribution.
METHODS Agilent 5 TC-C₁₈ (2) column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) was adopted, and acetonitrile (A)-0.1% formic acid aqueous solution (B) was used as the mobile phase for gradient elution. Assisted analysis through PeakView software, the chemical composition in the benchmark sample of the WJT was quickly identified, and the fingerprint of the benchmark sample of WJT was established by HPLC-UV and HPLC-ELSD.
RESULTS A total of 122 compounds were analyzed and identified by the benchmark sample of WJT, and the relevant herbs was attributed. The HPLC-UV fingerprint of benchmark sample of WJT had 19 common peaks, and 9 chromatographic peaks of gallic acid, paeoniflorin, glycyrrhizic acid, liquiritin, cinnamaldehyde, paeonol, ferulic acid, ligustilide and β-ecdysone were identified by comparison of reference substance. There were 8 common peaks in the HPLC-ELSD fingerprint, and ginsenoside Rg₁, ginsenoside Re, and ginsenoside Rb₁ were identified by comparison of reference substance. The two fingerprints of HPLC-UV and HPLC-ELSD established could belong to all herbs of the whole prescription.
CONCLUSION The method established by UV and ELSD is of high sensitivity, good stability and accuracy, which comprehensively reflects the overall characteristics of the benchmark sample of the WJT. The study provides a reliable basis for the establishment of quality standards for the benchmark sample of WJT.
- Wenjing Decoction /
- fingerprint /
- HPLC-Q-TOF/MS /
- chemical composition

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经典名方温经汤出自《妇人大全良方》, 该方由酒当归、川芎、芍药、桂心、牡丹皮、醋莪术、人参、炒甘草、酒牛膝9味药组成, 为妇科调经的常用方, 主要用于冲任虚寒而有瘀滞的月经不调^[1]、痛经^[2-3]、崩漏、不孕^[4]等。《古代经典名方关键信息表(7首方剂)》^[5](以下简称关键信息表)对其用法用量有明确规定“粉碎成粗粒, 每服20 g, 加水450 mL, 煎至240 mL, 去滓温服”。本团队在关键信息表颁布后, 完成了资源考察、产地优选、药材和饮片的质量研究以及基准样品的制备工艺研究, 并在此基础上对温经汤基准样品进行质量研究。

目前温经汤的研究主要集中在临床应用方面, 化学成分分析与指纹图谱的相关研究较少, 尚未有关于温经汤基准样品化学成分分析与指纹图谱同时测定的相关报道。本方成分复杂, 仅对部分指标性成分进行含量测定, 难以代表全方, 指纹图谱技术的运用能较为全面地表征复方复杂的化学成分信息^[6-9], 国家药监局药审中心发布的第36号文件^[10]明确指出“指纹/图谱一般以相似度或特征峰相对保留时间、相对峰面积等为检测指标, 主要成分在指纹/特征图谱中应尽可能得到指认, 必要时应建立多张指纹/特征图谱”。目前温经汤的图谱研究尚未指认全方所用药味，本研究通过HPLC-Q-TOF/MS技术分析基准样品的化学成分组成，并采用HPLC-UV和HPLC-ELSD法建立温经汤基准样品的指纹图谱，首次归属了全方所有药味，为古代经典名方温经汤基准样品的质量控制和新药研发打下基础。

1. 材料

1.1 仪器与试药

Waters e2695高效液相色谱仪(美国Waters公司), Waters 2998 PDA检测器(美国Waters公司), Triple TOF 5600型质谱仪(美国SCIEX公司), TD6002C型电子天平(天津天马衡基仪器有限公司), AUW120D型电子分析天平(日本岛津公司), KH-300E型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司), FTS-10A液体加热器(潮州市一壶百饮电器实业有限公司), FW100型高速粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。

甘草苷、甘草酸铵、芍药苷、桂皮醛、丹皮酚、阿魏酸、没食子酸、β-蜕皮甾酮、人参皂苷Rg₁、人参皂苷Rb₁对照品(中国食品药品检定研究院, 批号：111610-201607、110731-201720、110736-201035、110710-201821、110708-201407、110773-201313、110831-201906、111638-201706、110703-202034、110704-202129, 纯度：93.1%、97.7%、97.7%、99.4%、99.9%、99.6%、91.5%、95.0%、94.0%、94.3%), 人参皂苷Re、藁本内酯对照品(上海源叶生物科技有限公司, 批号: B04D9S76499、R21J10F91128, 纯度均≥98%)。

甲醇、乙腈(美国Tedia公司, 色谱纯), 超纯水(Unique-R10多功能超纯水系统制备), 甲酸(上海阿拉丁生化科技股份有限公司, 色谱纯)。

1.2 药材

温经汤所用饮片1批购自安徽省万生中药饮片有限公司, 5批由实验室炮制而成, 10批组方对应饮片批次见表 1, 实验室所用药材经南京中医药大学严辉教授鉴定, 按照2020版《中国药典》方法检测, 所用批次饮片质量均符合药典规定。

表 1 温经汤基准样品饮片来源及批号信息

Table 1. The origin and batch number of herbal pieces from WJT substance benchmarks

饮片	拉丁名	产地	批号
当归(酒)	Angelica sinensis(Oliv.) Diels	甘肃岷县	DG-191204、22012201、22012202、22012203、22012204、22012205
川芎	Ligusticum chuanxiong Hort.	四川彭州市四川眉山市	CX-200901、22022001、22022002、22022003、22022004、22022005
肉桂	Cinnamomum cassia Presl	广西平南县	RG-200901、22022401、22022402、22022403、22022404、22022405
白芍	Paeonia lactiflora Pall.	安徽亳州市	BS-191202、22022701、22022702、22022703、22022704、22022705
牡丹皮	Paeonia suffruticosa Andr.	安徽铜陵市安徽谯城区	MDP-201001、22022301、22022302、22022303、22022304、22022305
莪术(醋)	Curcuma phaeocaulis VaL.	云南红河州	EZ-201001、22030101、22030102、22030103、22030104、22030105
人参	Panax ginseng C. A. Mey.	吉林长白县	RS-200601、22030301、22030302、22030303、22030304、22030305
甘草(炒)	Glycyrrhiza uralensis Fisch.	甘肃岷县	GC-201001、22030501、22030502、22030503、22030504、22030505
牛膝(酒)	Achyranthes bidentata Bl.	河南武陟县	NX-190703、22030201、22030202、22030203、22030204、22030205
注: DG-191204、CX-200901、RG-200901、BS-191202、MDP-201001、EZ-201001、RS-200601、GC-201001、NX-190703批次饮片均购自安徽省万生中药饮片有限公司, 其余批次饮片均由实验室炮制。

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2. 方法与结果

2.1 HPLC-Q-TOF/MS成分分析

2.1.1 色谱条件

Agilent 5 TC-C₁₈(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm); 流动相A为乙腈, B为0.1%甲酸水溶液, 梯度洗脱(0~56.0 min, 3.0%~61.2%A; 56.0~56.1 min, 61.2%~80%A; 56.1~57.0 min, 80%~90%A; 57.0~65.0 min, 90%A); 检测波长254 nm; 进样量为10 μL; 流速0.8 mL·min^-1; 柱温30 ℃。

2.1.2 质谱条件

电喷雾离子源(ESI), 采用正负离子扫描检测, 质量扫描范围m/z 50~1 500;喷雾电压45 kV; 雾化气压力60 psi; 辅助气压力60 psi; 气帘气压力40 psi; 离子源温度600 ℃; 锥孔电压为100 V; 碰撞室射出电压40 eV。

2.1.3 供试品溶液的制备

按关键信息表中温经汤的用法用量, 称取每服处方量(各单味药批次随机组合成10批, 编号为S1~S10), 粉碎成最粗粉, 加水450 mL(22.5倍量), 浸泡30 min后武火至沸, 转至文火, 煎煮30 min(至240 mL), 100目双层纱布趁热过滤, 取滤液1 mL, 加2 mL甲醇, 混匀, 1 000 r·min^-1离心, 取上清液过0.45 μm微孔滤膜, 即得。

2.1.4 温经汤基准样品化学成分分析

使用上述色谱、质谱条件对供试品溶液进行正、负离子全扫描, 获得正、负离子模式下的总离子流图(Total ion chromatogram, TIC图), 见图 1。将数据导入PeakView软件, 从温经汤基准样品中共鉴别了122个化合物^[11-16], 具体见表 2。

图 1 温经汤正(A)、负(B)离子模式下的总离子流图

Figure 1. Total ion chromatogram of WJT in positive (A) and negative (B) ion modes

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表 2 温经汤基准样品HPLC-Q-TOF-MS分析

Table 2. HPLC-Q-TOF-MS analysis results of WJT substance benchmarks

峰号	分子式	t_R/min	加合离子类型	m/z (理论值)	m/z (实测值)	误差/×10^-6	主要碎片离子	化合物	来源
1	C₁₈H₂₈O₉	3.28	[M-H]^-	387.166 1	387.168 9	7.4	341.112 1, 179.058 0, 161.047 0, 119.036 5, 101.025 6, 89.026 0	川芎苷A	CX
2	C₆H₁₃NO₂	3.46	[M+H]⁺	132.101 9	132.101 8	-0.6	132.103 0, 58.070 8	异亮氨酸	DG
3	C₆H₁₂O₆	3.55	[M-H]^-	179.056 1	179.056 4	1.7	179.057 7, 161.047 3, 141.022 7, 99.010 2	葡萄糖	RS
4	C₁₂H₂₂O₁₁	4.06 4.05	[M+H]⁺ [M-H]^-	343.123 5 341.108 9	343.123 9 341.108 0	1.1 -2.7	163.061 8, 145.050 2, 73.031 3 341.111 8, 179.057 1, 119.036 1, 101.025 6, 89.025 6, 71.015 9, 59.016 8	麦芽糖	RS
5	C₅H₅N₅	4.22	[M+H]⁺	136.061 8	136.061 5	-2.0	136.063 0, 119.037 2, 92.027 5	腺嘌呤	CX
6	C₆H₈O₇	6.71	[M-H]^-	191.019 7	191.019 7	-0.2	191.021 7, 129.019 9, 87.010 5	枸橼酸	RS
7	C₉H₁₂N₂O₆	7.19	[M-H]^-	243.062 3	243.062 2	-0.1	243.063 3, 200.058 2, 110.026 6	尿苷	GC
8	C₁₀H₁₃N₅O₄	7.63	[M+H]⁺	268.104 0	268.103 9	-0.6	136.062 6, 119.036 4	腺苷	RS
9	C₁₃H₁₆O₁₀	8.35	[M-H]^-	331.067 1	331.066 7	-1.0	331.071 0, 271.050 4, 211.027 2, 169.015 6, 151.004 3, 125.026 0	没食子酰葡萄糖	MDP
10	C₇H₆O₅	10.04 10.07	[M+H]⁺ [M-H]^-	171.028 8 169.014 3	171.028 6 169.014 7	-1.0 2.5	171.029 3, 153.019 9, 125.024 7, 107.014 6 169.017 1, 125.026 4, 124.018 7	没食子酸^*	MDP
11	C₇H₆O₄	14.39	[M-H]^-	153.019 3	153.019 6	1.8	153.021 1, 109.031 0, 91.020 6	原儿茶酸	GC
12	C₁₈H₂₄O₈	16.49	[M+H]⁺	369.154 4	369.152 7	-4.7	369.152 6	Celephthalide A	CX
13	C₂₃H₂₈O₁₂	17.00 17.02	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	514.191 9 495.150 8	514.192 4 495.147 7	1.0 -6.2	197.081 5, 179.070 5, 139.039 8 301.074 7, 191.036 9, 150.033 8, 121.031 0	氧化芍药苷	BS
14	C₁₆H₁₈O₉	17.67	[M+Na]⁺	377.084 3	377.084 4	0.2	377.084 6, 215.053 2	绿原酸	DG
15	C₇H₆O₃	17.72	[M-H]^-	137.024 4	137.024 7	2.0	137.025 9, 92.028 0	对羟基苯甲酸	MDP
16	C₁₅H₁₄O₆	18.06 18.09	[M+H]⁺ [M-H]^-	291.086 3 289.071 8	291.086 6 289.071 4	1.0 -1.2	207.066 0, 165.054 7, 139.039 7, 123.045 7, 111.045 8 289.075 6, 205.053 1, 179.037 7, 163.041 7, 149.026 8, 137.026 1, 125.026 4, 109.031 0	儿茶素	BS, MDP
17	C₈H₈O₅	18.36	[M-H]^-	183.029 9	183.030 1	0.9	183.031 6, 168.008 1, 140.012 6, 124.018 5	没食子酸甲酯	MDP
18	C₂₇H₃₀O₁₅	19.53 19.54	[M+H]⁺ [M-H]^-	595.165 8 593.151 2	595.165 8 593.148 3	0.5 -4.9	595.166 4, 577.1547, 559.144 2, 433.093 3, 283.054 7 593.156 8, 503.123 3, 473.115 8, 353.070 3	山柰酚-3-O-芸香糖苷	GC
19	C₇H₆O₂	19.79	[M-H]^-	121.029 5	121.030 1	4.6	121.033 1, 77.041 4	苯甲酸	BS, MDP
20	C₈H₆O₄	19.79	[M-H]^-	165.019 3	165.019 5	0.9	121.032 0, 77.042 2	邻苯二甲酸	DG
21	C₂₀H₂₈O₁₂	20.18	[M-H]^-	459.150 8	459.148 7	-4.5	459.153 4, 165.057 4, 147.044 1	牡丹酚原苷	MDP
22	C₈H₈O₄	20.20	[M-H]^-	167.035 0	167.035 4	2.7	167.038 5, 152.011 6, 123.047 1, 121.030 4	香荚兰酸	CX
23	C₉H₈O₄	20.44	[M-H]^-	179.035 0	179.035 3	1.5	179.038 2, 135.046 8, 134.039 1	咖啡酸	CX
24	C₂₁H₂₂O₁₁	20.95	[M-H]^-	449.108 9	449.106 3	-6.0	413.939 2, 160.843 0	二氢槲皮素-7-O-鼠李糖苷	GC
25	C₂₃H₂₈O₁₁	21.06	[M-H]^-	479.155 9	479.154 2	-3.5	479.156 5, 121.029 6, 77.988 0	芍药内酯苷	BS
26	C₂₃H₂₈O₁₁	21.06 22.24	[M+H]⁺ [M-H]^-	481.170 4 479.155 9	481.170 9 479.152 6	0.9 -6.9	319.118 4, 301.107 5, 197.081 6, 105.035 7 479.163 9, 449.147 6, 327.111 5, 165.057 5, 121.031 0, 77.041 7	芍药苷^*	BS
27	C₃₀H₃₂O₁₆	21.23 21.25	[M+Na]⁺ [M-H]^-	671.158 3 647.161 8	671.159 1 647.158 7	1.3 -4.8	503.153 9, 341.101 4 647.167 9, 629.155 8, 509.134 0, 491.125 7, 399.096 4, 313.058 8, 271.027 7, 211.027 7	没食子酰氧化芍药苷	BS, MDP
28	C₂₇H₂₄O₁₈	21.33 21.34	[M+Na]⁺ [M-H]^-	659.096 3 635.089 0	659.086 6 635.085 6	1.6 -5.3	659.087 1, 489.067 3 635.095 7, 483.082 8, 465.072 0, 313.059 9, 169.015 9, 125.024 9	1, 3, 6-三没食子酰葡萄糖	MDP
29	C₂₆H₂₈O₁₄	21.49 21.50	[M+H]⁺ [M-H]^-	565.155 2 563.140 6	565.155 6 563.137 3	0.7 -6.0	565.154 5, 547.143 3, 409.093 0, 309.080 0 563.145 6, 473.114 2, 443.102 6, 383.081 1	芹菜苷	GC
30	C₉H₁₀O₂	22.24	[M+H]⁺	151.075 4	151.074 9	-2.9	95.088 0, 81.035 0, 67.057 2	3-甲氧基-4-羟基苯乙烯	CX
31	C₁₀H₁₀O₃	22.24	[M+H]⁺	179.063 0	179.070 3	-0.8	179.071 6, 161.060 7, 133.066 6	松柏醛	RG
32	C₂₄H₃₀O₁₃	22.27	[M-H]^-	525.161 4	525.157 5	-7.4	525.166 4, 327.110 6, 165.057 1	牡丹皮苷E	MDP
33	C₂₇H₃₂O₁₄	23.17 22.58	[M+H]⁺ [M-H]^-	581.186 5 579.171 9	581.186 7 579.167 9	0.5 -7.0	581.186 2, 257.080 4 579.176 8, 255.068 5, 135.011 1, 119.051 6	柚皮苷	GC
34	C₂₁H₂₀O₉	23.31	[M+H]⁺	417.118 0	417.118 2	0.4	417.116 8, 255.065 1	异黄酮苷	GC
35	C₂₇H₃₀O₁₄	23.51 23.52	[M+H]⁺ [M-H]^-	579.170 8 577.156 3	579.170 6 577.152 6	-0.5 -6.3	579.170 6, 561.160 3, 543.152 1 577.160 4, 457.116 3, 413.088 8, 383.079 5	野漆树苷	MDP
36	C₃₄H₂₈O₂₂	23.89 23.91	[M+Na]⁺ [M-H]^-	811.096 4 787.100 0	811.097 2 787.095 8	0.9 -5.3	811.098 4, 641.077 5, 471.053 0, 301.032 5 787.108 0, 635.094 3, 617.084 3, 465.072 2, 169.016 0	1, 2, 3, 6-四没食子酰葡萄糖	MDP
37	C₂₇H₄₄O₇	24.19	[M+H]⁺	481.316 0	481.315 9	-0.1	481.313 9, 463.307 4, 445.296 3, 301.180 7	β-蜕皮甾酮^*	NX
38	C₂₇H₃₂O₁₆	24.35	[M-H]^-	611.161 8	611.157 9	-6.3	611.168 3, 445.103 4, 169.016 7, 165.057 1, 125.025 4	牡丹苷A/C	MDP
39	C₁₅H₁₂O₄	24.70	[M+H]⁺	257.080 8	257.080 9	0.2	257.080 8, 147.044 7, 137.023 8, 119.050 8	甘草素	GC
40	C₂₆H₃₀O₁₃	24.74	[M-H]^-	549.161 4	549.157 3	-7.5	549.165 8, 255.068 1, 135.010 1, 119.051 8	芹糖甘草苷	GC
41	C₁₅H₂₂O₄	25.00	[M+H]⁺	267.159 1	267.159 0	-0.3	249.149 1, 231.129 8, 69.071 7	Verrucarol	EZ
42	C₂₁H₂₂O₉	25.30 25.34	[M+H]⁺ [M-H]^-	419.133 7 417.119 1	419.134 2 417.116 6	1.3 -6.0	257.081 2, 239.070 4, 147.044 3, 137.024 2 417.122 1, 254.068 3, 135.010 3, 119.051 9, 91.021 0	甘草苷^*	GC
43	C₁₅H₁₂O₄	25.32	[M+H]⁺	257.080 8	257.080 7	-0.7	257.081 3, 147.044 3, 137.0241, 119.049 9, 91.056 4	乔松素	GC
44	C₄₁H₃₂O₂₆	25.78 25.80	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	958.152 0 939.110 9	958.153 2 939.105 1	1.2 -6.2	771.1031, 153.0190, 125.0241 939.120 5, 769.096 6, 617.085 0, 601.088 3, 169.016 2	五没食子酰葡萄糖	BS, MDP
45	C₃₀H₃₂O₁₅	25.81 25.84	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	650.208 0 631.166 8	650.207 6 631.162 6	-0.5 -6.7	493.135 3, 315.072 2, 297.062 8, 153.019 5, 127.041 4 297.078 8, 255.068 1	没食子酰芍药苷	BS, MDP
46	C₁₀H₁₀O₄	26.37 26.38	[M+H]⁺ [M-H]^-	195.065 2 193.050 6	195.065 1 193.050 6	-0.6 0.0	177.055 8, 149.060 0, 145.028 3, 134.036 5, 117.034 3 193.052 8, 178.029 4, 149.061 8, 134.038 8	阿魏酸^*	CX, DG
47	C₃₀H₃₂O₁₄	27.42 27.43	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	634.213 0 615.171 9	634.212 8 615.167 5	-0.4 -7.2	283.083 0, 265.072 5, 139.040 1, 121.027 5 615.178 0, 281.069 4, 137.026 8	牡丹皮苷H	MDP
48	C₂₁H₂₀O₁₀	28.85	[M+H]⁺	433.112 9	433.112 9	-0.1	271.060 2, 153.018 4	牡荆素	GC
49	C₁₅H₁₂O₅	29.16	[M+H]⁺	273.075 8	273.075 7	-0.4	273.077 7, 153.018 5, 147.045 0, 119.052 7, 69.034 7	柚皮素	GC
50	C₁₅H₁₀O₅	29.20	[M-H]^-	269.045 6	269.044 7	-3.3	269.047 2, 133.031 4	芹菜素	GC
51	C₂₄H₃₀O₁₂	29.43	[M-H]^-	509.166 5	509.162 5	-7.8	509.172 3, 341.128 1, 121.031 5, 77.039 8	牡丹皮苷D	MDP
52	C₁₆H₁₄O₆	29.59 29.60	[M+H]⁺ [M-H]^-	303.790 4 301.071 8	303.086 2 301.070 4	-0.2 -4.7	303.087 1, 261.075 9, 193.049 9, 178.026 9, 163.038 9, 150.031 8, 139.039 9, 137.024 1, 123.044 4 301.074 7, 286.051 4, 161.026 4, 150.033 8	橙皮素	GC
53	C₉H₁₆O₄	29.88	[M-H]^-	187.097 6	187.097 4	-1.1	187.098 5, 169.089 2, 125.098 5	壬二酸	DG
54	C₄₈H₈₂O₁₈	29.97	[M+Na]⁺	969.539 3	969.538 5	0.5	969.536 5	人参皂苷Re^*	RS
55	C₈H₈O₃	30.50	[M-H]^-	151.040 1	151.040 2	0.6	151.038 1, 135.009 9, 109.030 7, 91.020 6	香草醛	CX
56	C₂₂H₂₆O₁₁	30.93	[M+Na]⁺	489.136 7	489.138 4	3.5	285.076 5, 270.053 2	仙茅苷	GC
57	C₁₂H₁₄O₃	31.31	[M+H]⁺	207.101 6	207.101 3	-1.5	207.101 2, 189.090 9, 165.054 7, 123.044 1, 95.052 6, 67.058 1	4-羟基-3-丁基苯酞	CX
58	C₂₂H₂₂O₉	31.58	[M+H]⁺	431.133 7	431.133 3	-0.8	269.081 1, 254.058 1, 237.055 2	芒柄花苷	GC
59	C₃₀H₃₂O₁₃	31.80	[M+NH₄]⁺	618.218 1	618.217 9	-0.3	283.080 3, 265.070 6, 179.070 0, 139.038 9, 121.029 9	牡丹皮苷C	MDP
60	C₃₁H₃₄O₁₄	31.88	[M+NH₄]⁺	648.228 7	648.228 8	0.2	313.093 0, 295.082 5, 169.050 7, 151.039 8	牡丹皮苷J	MDP
61	C₁₅H₁₀O₄	32.82 32.83	[M+H]⁺ [M-H]^-	255.065 2 253.050 6	255.065 0 253.049 5	-0.9 -4.3	255.065 0, 145.028 8, 137.024 1 253.052 3, 135.009 5, 117.036 0, 91.019 8	7, 4′-二羟基黄酮	GC
62	C₃₀H₃₂O₁₃	33.17	[M+NH₄]⁺	618.218 1	618.216 6	-2.5	445.156 2, 317.103 3, 267.087 1, 249.076 9, 179.070 3, 105.035 6	苯甲酰氧化芍药苷	BS
63	C₁₆H₁₄O₅	33.84 33.86	[M+H]⁺ [M-H]^-	287.091 4 285.076 9	287.091 2 285.075 6	-0.6 -4.3	287.091 6, 245.081 3, 193.049 1, 150.032 0, 121.029 8 285.079 4, 270.055 6, 177.021 5, 150.033 8, 121.023 3	甘草查尔酮B	GC
64	C₁₆H₁₂O₆	35.06 35.06	[M+H]⁺ [M-H]^-	301.070 7 299.056 1	301.070 6 299.054 8	-0.2 -4.4	301.071 4, 273.104 7, 258.057 0, 139.041 9, 123.043 8 299.058 6, 284.035 6, 256.040 2	3-(2, 4-二羟基苯基)-7-羟基-5-甲氧基-2H-1-苯并吡喃-2-酮	GC
65	C₁₅H₁₂O₄	35.14	[M-H]^-	255.066 3	255.065 6	-2.8	255.067 8, 135.010 6, 119.051 8, 91.021 1	异甘草素	GC
66	C₁₆H₁₂O₅	35.81 35.83	[M+H]⁺ [M-H]^-	285.075 8 283.061 2	285.076 1 283.059 5	0.5 -5.9	285.075 8, 270.053 4, 269.043 2, 253.048 8, 213.055 5, 137.023 6 283.062 8, 268.038 8, 267.031 2, 239.036 8, 211.042 2	毛蕊异黄酮	GC
67	C₁₅H₁₀O₇	36.22	[M-H]^-	301.035 4	301.034 1	-4.2	301.037 8, 273.037 5, 151.005 6, 121.030 4, 107.016 2, 93.034 8	槲皮素	GC
68	C₄₂H₇₂O₁₄	37.62	[M-H]^-	799.484 9	499.478 0	-8.7	799.493 4, 637.438 5, 475.387 0	人参皂苷Rg₁^*	RS
69	C₃₀H₃₂O₁₂	37.69 37.70	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	602.223 2 583.182 1	602.222 4 583.177 5	-1.3 -7.8	445.152 0, 301.105 2, 267.086 8, 249.076 3, 179.071 2, 151.076 4, 105.035 9 583.185 3, 553.164 1, 431.144 9, 121.030 9	苯甲酰芍药苷	BS
70	C₅₄H₉₂O₂₃	38.18	[M+Na]⁺	1131.592 2	1131.589 9	-2.0	1 131.588 4, 365.104 9	人参皂苷Rb₁^*	RS
71	C₁₂H₁₂O₂	39.09	[M+H]⁺	189.091 0	189.091 0	0.1	189.094 0, 171.079 2, 161.057 4, 143.050 8, 105.035 9, 77.041 4	丁烯基苯酞	DG
72	C₄₁H₇₀O₁₂	39.11	[M+Na]⁺	777.476 0	777.476 1	0.2	777.474 8, 335.095 4	人参皂苷CY	RS
73	C₄₂H₇₂O₁₃	39.87	[M+Na]⁺	807.486 5	807.485 1	-1.7	807.487 2, 349.114 6	人参皂苷F₂	RS
74	C₁₆H₁₄O₄	39.99 40.01	[M+H]⁺ [M-H]^-	271.096 5 269.081 9	271.096 4 269.080 4	0.5 -5.9	271.094 7, 229.086 9, 177.054 5, 134.036 7, 121.029 4, 107.050 7, 93.035 7 269.084 1, 237.056 1, 175.041 9, 161.025 9, 133.031 1, 120.0226, 92.028 3	刺甘草查尔酮	GC
75	C₄₈H₇₆O₁₉	40.26	[M+Na]⁺	979.487 3	979.485 5	-1.9	979.485 3, 641.400 7	人参皂苷Ro	RS
76	C₉H₈O	40.94	[M+H]⁺	133.064 8	133.064 5	-2.1	133.068 4, 103.056 2, 77.042 2	桂皮醛^*	RG
77	C₁₅H₁₆O₃	41.02	[M+H]⁺	245.117 2	245.117 0	-0.8	245.117 3, 229.086 2, 225.089 7, 201.090 0, 169.063 4	Kwangsiensis A	EZ
78	C₁₆H₁₂O₅	41.23	[M-H]^-	283.061 2	283.059 5	-5.9	283.062 8, 268.038 9, 224.048 2, 135.010 3	樱黄素	GC
79	C₃₀H₄₆O₅	41.97	[M+H]⁺	487.341 8	487.340 7	-2.3	487.341 7, 317.210 4	24-羟基甘草次酸	GC
80	C₃₀H₄₄O₄	41.97	[M+H]⁺	491.313 2	491.311 8	-2.3	469.330 9, 451.321 1, 439.319 8, 235.168 8	光甘草内酯	GC
81	C₁₆H₁₂O₆	42.78 42.81	[M+H]⁺ [M-H]^-	301.070 7 299.056 1	301.070 8 299.053 4	0.5 -9.1	301.072 4, 286.046 5, 285.038 9, 258.052 7, 229.048 0, 136.016 2, 121.029 9 299.056 8, 284.034 5, 255.031 2, 227.036 7	金圣草(黄) 素	GC
82	C₅₅H₉₂O₂₃	43.01	[M+Na]⁺	1143.592 2	1143.590 8	-1.2	1 143.589 6, 831.487 5	人参皂苷Rs₂	RS
83	C₉H₁₀O₃	43.90	[M+H]⁺	167.070 3	167.070 1	-0.9	167.071 5, 149.061 3, 125.061 2, 121.066 8	丹皮酚^*	MDP
84	C₃₀H₄₆O₄	44.21	[M+H]⁺	471.346 9	471.346 5	-0.9	471.346 2, 317.211 6, 235.169 1	甘草次酸	GC
85	C₄₂H₆₂O₁₆	44.23	[M+H]⁺	823.411 1	823.410 1	-1.2	823.406 5, 647.377 6, 471.347 6, 453.335 4, 435.324 2, 407.329 5	甘草酸^*	GC
86	C₁₀H₁₀O₂	44.76	[M+H]⁺	163.075 4	163.075 2	-1.2	163.077 4, 135.079 8, 131.048 1, 107.051 0, 103.054 5, 77.042 0	邻甲氧基肉桂醛	RG
87	C₉H₁₀O	44.76	[M+H]⁺	135.073 2	135.080 3	-0.9	103.055 1, 77.042 3	肉桂醇	RG
88	C₁₂H₁₄O₃	44.87	[M-H]^-	205.087 0	205.085 7	-6.4	161.097 4, 119.947 3, 83.052 1	4-羟基-3-丁基苯酞	DG
89	C₁₆H₁₂O₄	45.03 45.04	[M+H]⁺ [M-H]^-	269.080 8 267.066 3	269.080 4 267.064 5	-1.6 -6.8	269.080 8, 254.056 2, 253.049 0, 237.054 0, 226.062 1 267.066 9, 252.043 8, 223.040 4, 135.009 1	刺芒柄花素	GC
90	C₁₂H₁₄O₃	47.03 47.06	[M+H]⁺ [M-H]^-	207.101 6 205.087 0	207.100 7 205.086 2	-4.2 -4.2	191.004 2, 151.038 7, 147.044 3, 105.035 2, 77.041 9 205.088 8, 161.098 8, 106.044 5	洋川芎内酯F	DG
91	C₁₆H₂₂O₄	48.69	[M+H]⁺	279.159 1	279.158 8	-1.0	279.160 7, 149.023 6, 121.030 1, 105.033 7, 79.054 1	邻苯二甲酸二丁酯	CX
92	C₁₆H₁₄O₄	49.36	[M+H]⁺	271.096 5	271.095 6	0.5	271.099 5, 161.060 8, 109.066 6	美迪紫檀素	GC
93	C₁₂H₁₂O₃	49.64	[M-H]^-	203.071 4	203.070 7	-3.4	203.073 2, 173.025 6, 160.017 9, 145.031 1	3-丁烯基-7-羟基苯酞	CX
94	C₂₀H₂₂O₆	51.91	[M-H]^-	357.134 4	357.130 8	-8.9	357.135 5, 232.075 0, 149.025 7, 109.031 4	松脂素	GC
95	C₂₀H₂₀O₆	52.58	[M-H]^-	355.118 7	355.115 5	-9.1	355.120 6, 229.088 4, 174.033 4, 83.015 7	阿魏酸松柏酯	DG
96	C₁₅H₂₀O	52.67	[M+H]⁺	217.158 7	217.158 1	-2.5	176.116 2, 162.099 3	莪术烯	EZ
97	C₁₅H₂₂O₂	52.69	[M+Na]⁺	257.151 2	257.151 0	-0.8	257.150 9	羟基雅槛蓝酮	EZ
98	C₂₀H₁₈O₇	53.59	[M-H]^-	369.098 0	369.094 7	-8.8	369.098 9, 300.029 8, 151.005 3, 107.017 7	乌拉尔醇	GC
99	C₁₂H₁₆O₂	53.61	[M+H]⁺	193.122 3	193.121 8	-2.9	193.121 6, 137.060 3, 77.042 3	洋川芎内酯A	CX
100	C₁₇H₁₄O₆	53.76	[M-H]^-	313.071 8	313.069 5	-7.2	313.073 0, 298.049 1, 283.026 2, 255.031 1	华良姜素	GC
101	C₂₀H₁₈O₆	54.23	[M+H]⁺	355.117 6	355.118 3	1.9	355.118 2, 337.106 6, 299.056 0, 243.064 2, 179.034 0, 151.039 8	甘草黄酮醇	GC
102	C₂₀H₂₀O₅	54.88 54.91	[M+H]⁺ [M-H]^-	341.138 4 339.122 2	341.137 6 339.120 8	-2.1 -8.8	341.136 0, 285.075 6, 272.068 9, 257.082 3 325.104 3, 282.050 0, 270.050 6, 254.054 1	鳞叶甘草素B	GC
103	C₁₅H₁₄O	55.06	[M+H]⁺	211.111 7	211.111 4	-1.5	211.110 6, 196.089 5, 195.079 5, 181.066 2, 152.062 2, 151.055 4	乌药薁	EZ
104	C₇H₆O₃	55.07	[M+H]⁺	139.039 0	139.038 6	-2.7	139.039 1, 121.029 1, 93.035 9	水杨酸	BS
105	C₂₀H₁₈O₆	55.69	[M+H]⁺	355.117 6	355.117 4	-0.6	355.118 2, 337.106 6, 229.085 9, 201.091 5, 189.091 0, 179.034 0, 153.018 7	甘草异黄烷酮	GC
106	C₂₁H₂₂O₄	56.08	[M+H]⁺	339.159 1	339.158 4	-2.0	339.159 6, 297.150 7, 271.096 9, 121.029 7, 93.036 2	甘草查尔酮A	GC
107	C₂₀H₁₈O₅	57.13	[M+H]⁺	339.122 7	339.122 5	-0.6	339.122 8, 283.060 5	黄羽扇豆魏特酮	GC
108	C₁₂H₁₄O₂	57.16	[M+H]⁺	191.106 7	191.105 2	-7.6	191.106 9, 161.060 5, 149.060 8, 79.057 6	正丁基苯酞	DG
109	C₂₀H₁₈O₅	57.34 57.36	[M+H]⁺ [M-H]^-	339.122 7 337.108 2	339.122 1 337.105 5	-1.9 -7.8	355.121 0, 299.060 8, 287.055 3, 271.060 9, 229.086 5, 69.074 6 337.110 1, 281.047 8, 145.030 5	鳞叶甘草素A	GC
110	C₁₅H₂₂O	58.13	[M+H]⁺	219.174 3	219.173 9	-2.0	176.119 3, 149.100 1, 133.067 3, 121.102 5, 119.087 1, 109.102 0, 105.070 4, 97.068 1	莪术酮	EZ
111	C₁₅H₂₄O₂	58.18	[M+H]⁺	237.184 9	237.184 2	-3.1	237.106 9, 107.087 5, 93.072 7	莪术二酮	EZ
112	C₁₂H₁₈O₂	58.57	[M+H]⁺	195.138 0	195.137 7	-1.4	81.073 4, 79.057 8	新蛇床内酯	CX
113	C₂₀H₂₀O₄	58.63	[M+H]⁺	325.143 4	325.143 1	-1.1	325.141 2, 149.060 2, 147.040 1, 121.192 8, 103.053 4, 77.041 8	光甘草宁	GC
114	C₁₂H₁₄O₂	59.21	[M+H]⁺	191.106 7	191.106 3	-1.9	191.106 6, 173.096 1, 145.100 9	Z-藁本内酯^*	CX, DG
115	C₂₀H₁₈O₆	59.46	[M+H]⁺	355.117 6	355.117 1	-1.5	355.120 3, 299.055 6, 121.030 3	甘草异黄酮A	GC
116	C₁₅H₂₀O	60.04	[M+H]⁺	217.158 7	217.158 5	-0.9	217.158 9, 202.137 5, 189.127 4, 175.112 9, 161.096 0, 149.096 7, 135.082 1, 119.086 7, 109.102 1	呋喃二烯	EZ
117	C₉H₈O₂	60.07	[M+H]⁺	149.059 7	149.059 2	-3.6	149.062 3, 121.032 5	肉桂酸	RG
118	C₁₅H₁₈O₂	60.10	[M+H]⁺	231.138 0	231.137 6	-1.8	231.138 1, 175.077 1, 173.096 2, 163.073 5, 161.060 0, 147.080 9, 135.081 4, 119.086 5, 105.071 2, 83.087 7	表莪术烯酮	EZ
119	C₂₀H₁₆O₅	60.42 60.43	[M+H]⁺ [M-H]^-	337.107 1 335.092 5	337.106 8 335.089 4	-0.9 -9.3	337.106 4, 319.096 2, 295.058 0 335.094 0, 320.069 0, 319.063 5, 317.082 1, 305.045 4	光甘草酮	GC
120	C₂₅H₂₆O₆	61.19	[M+H]⁺	423.180 2	423.178 9	-3.2	423.180 6, 367.117 4, 311.057 4, 299.054 0	粗毛甘草素A	GC
121	C₂₅H₃₂O₅	62.38	[M+H]⁺	413.232 3	413.231 7	-1.4	191.106 4, 149.060 2, 135.043 6	Wallichilide	CX
122	C₂₄H₂₈O₄	62.62	[M+H]⁺	381.206 0	381.205 8	-0.8	191.106 8, 149.060 0, 135.044 6	欧当归内酯A	DG
注: CX、DG、NX、EZ、GC、RG、RS、BS、MDP为川芎、当归、牛膝、莪术、甘草、肉桂、人参、白芍和牡丹皮; ^*表示化合物10、26、37、42、46、54、68、70、76、83、85、114在图谱中均有较高的峰, 且与对照品在图谱的相应位置出峰。

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通过HPLC-Q-TOF/MS分析鉴别出122个化合物, 包括有机酸、黄酮类、苷类、萜类、甾体、鞣质类等, 对其药味来源进行归属, 其中45个源自甘草, 6个源自白芍, 15个源自牡丹皮, 13个源自川芎, 10个源自当归, 11个源自人参, 1个源自牛膝, 5个源自肉桂, 9个源自莪术, 化合物16、19、27、44、45为白芍、牡丹皮共有成分, 化合物46和114为川芎、当归共有成分。

2.2 温经汤指纹图谱的建立

2.2.1 色谱条件

同“2.1.1”项下色谱条件。

2.2.2 供试品溶液的制备

同“2.1.3”项下供试品溶液的制备。

2.2.3 对照品溶液的制备

取没食子酸、芍药苷、β-蜕皮甾酮、甘草苷、阿魏酸、桂皮醛、丹皮酚、甘草酸、藁本内酯对照品适量, 精密称定, 加甲醇制成质量浓度分别为123.53、7.05、4.19、10.48、13.75、17.19、3.73、71.21、10.14 μg·mL^-1的混合对照品溶液。

2.2.4 各单味药及阴性供试品的制备

分别称取处方中每服剂量所需相应饮片的量(S1中各批次单味药)，按照“2.1.2”项下方法制备, 得单味药供试品溶液。

分别称取处方中每服剂量所需相应的缺当归、缺肉桂、缺白芍、缺牡丹皮、缺牛膝、缺川芎、缺甘草、缺莪术、缺人参9个缺单味药和缺当归、肉桂，缺白芍、牡丹皮2个双缺药(S1中各批次单味药)，按照“2.1.2”项下方法制备, 得阴性对照供试品溶液。

2.2.5 方法学考察

2.2.5.1 精密度试验

取“2.1.3”项下制备供试品溶液, 色谱条件同“2.1.1”, 连续进样6针, 以阿魏酸色谱峰为参照峰(S), 计算各共有峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积RSD值, 各共有峰相对保留时间RSD小于1%, 相对峰面积RSD小于5%, 表明仪器精密度良好。

2.2.5.2 重复性试验

取每服饮片量, 按照“2.1.3”项下制备得6份供试品溶液, 按照“2.1.1”项下色谱条件进样分析, 以阿魏酸色谱峰为参照峰(S), 计算各共有峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积RSD值, 各共有峰相对保留时间RSD小于1%, 相对峰面积RSD小于5%, 表明重复性良好。

2.2.5.3 稳定性考察

取同一批供试品溶液, 同“2.1.1”项下色谱条件分别于0、4、8、12、16、24 h进样测定, 以阿魏酸色谱峰为参照峰(S), 计算各共有峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积RSD值, 各共有峰相对保留时间RSD小于1%, 相对峰面积RSD小于5%, 表明样品在24 h内稳定。

2.2.6 温经汤基准样品指纹图谱相似度评价

按照“2.1.1”项的指纹图谱条件, 按照“2.1.3”项的方法制备S1~S10供试品溶液, 并进行HPLC-UV测定, 得到10批温经汤HPLC-UV指纹图谱。将10批温经汤指纹图谱依次导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》软件, 以S5为参照图谱, 采用中位数法, 时间窗宽度为0.1, 进行多点校正, 标注19个共有峰, 并进行Mark峰匹配, 生成对照图谱并计算相似度, 10批温经汤基准样品指纹图谱的相似度均>0.910, 具体数据见表 3。温经汤对照指纹图谱(R)和10批温经汤叠加图谱(S1~S10)见图 2。

表 3 10批温经汤基准样品HPLC-UV指纹图谱相似度

Table 3. Similarity of fingerprint of 10 batches of WJT substance benchmarks

批号	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	对照
S1	1.000	0.979	0.994	0.994	0.984	0.963	0.987	0.972	0.991	0.966	0.989
S2	0.979	1.000	0.991	0.990	0.995	0.995	0.990	0.996	0.990	0.993	0.997
S3	0.994	0.991	1.000	0.998	0.992	0.980	0.994	0.987	0.996	0.983	0.997
S4	0.994	0.990	0.998	1.000	0.994	0.980	0.993	0.986	0.996	0.983	0.997
S5	0.984	0.995	0.992	0.994	1.000	0.990	0.988	0.992	0.990	0.989	0.996
S6	0.963	0.995	0.980	0.980	0.990	1.000	0.987	0.994	0.984	0.992	0.991
S7	0.987	0.990	0.994	0.993	0.988	0.987	1.000	0.989	0.999	0.986	0.997
S8	0.972	0.996	0.987	0.986	0.992	0.994	0.989	1.000	0.988	0.999	0.995
S9	0.991	0.990	0.996	0.996	0.990	0.984	0.999	0.988	1.000	0.986	0.998
S10	0.966	0.993	0.983	0.983	0.989	0.992	0.986	0.999	0.986	1.000	0.992
对照	0.989	0.997	0.997	0.997	0.996	0.991	0.997	0.995	0.998	0.992	1.000

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图 2 温经汤对照指纹图谱(R)及10批温经汤叠加图谱(S1~S10)

Figure 2. Reference fingerprint (R) and fingerprint of 10 batches of WJT (S1-S10)

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2.2.7 温经汤指纹图谱峰指认及峰归属

将温经汤指纹图谱与混合对照品溶液、单味药材供试品溶液及各药材阴性对照供试品溶液进行比对, 指认出其中9个色谱峰(图 3), 并对19个共有峰进行归属(图 4), 其中10个峰来源于甘草(5、6、8、9、10、11、12、14、16、17), 4个峰来源于牡丹皮(1、2、3、15), 1个峰来源于白芍(3), 1个峰来源于牛膝(4), 2个峰来源于当归(7、19), 2个峰来源于川芎(7、19), 1个峰来源于肉桂(13), 1个峰来源于莪术(18)。峰3是白芍和牡丹皮的共有成分, 峰7和峰19是川芎和当归的共有成分, 除人参药味尚无共有峰归属, 其余药味均有归属。

图 3 HPLC-UV混合对照品图(C)及温经汤对照指纹图谱(S1)对比图

注: 1.没食子酸; 3.芍药苷; 4.β-蜕皮甾酮; 6.甘草苷; 7.阿魏酸; 13.桂皮醛; 15.丹皮酚; 16.甘草酸; 19.藁本内酯

Figure 3. Comparison diagram of HPLC-UV mixed reference (C) and WJT reference fingerprint (S1)

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图 4 单味药材共有峰归属

注: S1.全方; S2.牛膝; S3.莪术; S4.肉桂; S5.甘草; S6.川芎; S7.当归; S8.川芎和当归; S9.白芍; S10.牡丹皮; S11.白芍和牡丹皮; S12.人参

Figure 4. Common peak attribution of single medicine materials

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2.2.8 温经汤参照峰的选择及相对保留时间的计算

综合10批温经汤基准样品保留时间结果，详见表 4，确定了温经汤基准样品的鉴别标准，建议煎液指纹图谱中应有19个共有峰，并以保留时间及峰面积相对适中且相对稳定的阿魏酸(7号峰)作为参照峰(S峰)，计算各共有峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间偏差应在规定值的±10%之内。规定值为：0.387(峰1)、0.655(峰2)、0.849(峰3)、0.927(峰4)、0.940(峰5)、0.962(峰6)、1.000(峰7)、1.150(峰8)、1.198(峰9)、1.381(峰10)、1.465(峰11)、1.478(峰12)、1.538(峰13)、1.591(峰14)、1.648(峰15)、1.675(峰16)、1.762(峰17)、1.980(峰18)、2.223(峰19)。本方挥发性成分较多，不同批次和来源饮片之间存在较大差异，相对峰面积RSD值相对偏高，除峰13(桂皮醛)、峰18(莪术)两峰相对峰面积>30%外，其他峰的相对峰面积均 < 30%。确定药材产地、批次以及具体炮制方法后，可全面把控全方的整体质量，缩小批次间差异。

表 4 10批温经汤基准样品共有峰相对保留时间

Table 4. Relative shift of retention time of characteristic peaks in transfer among 10 batches of WJT

峰号	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	RSD/%
1	0.387	0.387	0.387	0.386	0.390	0.388	0.388	0.387	0.387	0.386	0.28
2	0.655	0.655	0.655	0.655	0.658	0.655	0.655	0.655	0.654	0.655	0.15
3	0.850	0.850	0.849	0.848	0.850	0.848	0.848	0.849	0.849	0.849	0.07
4	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.926	0.04
5	0.940	0.940	0.942	0.941	0.940	0.939	0.941	0.940	0.941	0.939	0.08
6	0.962	0.962	0.963	0.962	0.962	0.962	0.962	0.962	0.962	0.962	0.02
7	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	0.00
8	1.149	1.150	1.149	1.150	1.148	1.151	1.150	1.151	1.150	1.151	0.08
9	1.198	1.197	1.198	1.198	1.195	1.198	1.199	1.198	1.198	1.198	0.08
10	1.381	1.381	1.382	1.384	1.376	1.382	1.382	1.382	1.381	1.383	0.15
11	1.465	1.464	1.465	1.467	1.459	1.465	1.465	1.465	1.465	1.467	0.16
12	1.478	1.479	1.479	1.481	1.472	1.478	1.479	1.479	1.478	1.481	0.16
13	1.539	1.538	1.539	1.539	1.533	1.538	1.538	1.539	1.538	1.540	0.12
14	1.591	1.591	1.592	1.595	1.584	1.591	1.590	1.591	1.591	1.593	0.17
15	1.649	1.648	1.648	1.649	1.642	1.648	1.648	1.649	1.648	1.650	0.13
16	1.675	1.675	1.675	1.679	1.667	1.675	1.674	1.675	1.674	1.676	0.17
17	1.763	1.763	1.763	1.767	1.754	1.763	1.762	1.763	1.762	1.764	0.18
18	1.981	1.981	1.981	1.981	1.972	1.980	1.980	1.980	1.980	1.982	0.15
19	2.226	2.225	2.225	2.224	2.213	2.224	2.223	2.223	2.224	2.226	0.17

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2.3 皂苷类成分的指纹图谱研究

在HPLC-UV法建立的温经汤基准样品指纹图谱中, 因人参皂苷类成分具有末端吸收, 与其他成分吸收波长有较大差异, 尚未有人参共有峰的归属, 为全面表征基准样品的整体特征, 进一步对基准样品进行萃取纯化, 通过HPLC-ELSD法, 建立了1张能够表征人参的皂苷类成分指纹图谱^[17-20], 弥补HPLC-UV图谱中无法体现全方整体药味的不足。

2.3.1 色谱条件

Agilent 5 TC-C₁₈(2)色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm); 流动相A为乙腈, B为水, 梯度洗脱(0~30.0 min, 15.0%~23.0%A; 30.0~60.0 min, 23.0%~40.0%A; 60.0~70.0 min, 40%A); 漂移管温度90 ℃; 载气体积流量1.6 L·min^-1; 进样量10 μL; 流速1.0 mL·min^-1; 柱温25 ℃。

2.3.2 供试品溶液的制备

按“2.1.3”项下, 称取温经汤每服处方量(S1~S10), 粉碎, 制备10批煎液基准样品, 冷冻干燥, 得基准样品冻干粉。精密称定冻干粉各5 g, 精密加水50 mL, 密塞, 称定质量, 超声30 min, 冷却至室温, 补足失质量, 过滤。滤液用水饱和正丁醇萃取3次, 每次50 mL, 合并正丁醇萃取液, 用2%NaOH洗2次, 每次50 mL, 再用蒸馏水50 mL洗2次, 弃去水液, 正丁醇层置水浴锅上蒸干, 残渣加甲醇溶解并转移至10 mL量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 过0.45 μm微孔滤膜, 即得。

2.3.3 对照品溶液的制备

取人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re、人参皂苷Rb₁对照品适量, 精密称定, 加甲醇制成质量浓度分别为1.012、0.258、1.035 mg·mL^-1的对照品溶液。

2.3.4 方法学考察

2.3.4.1 精密度试验

取“2.3.2”项下制备供试品溶液, 色谱条件同“2.3.1”, 连续进样6针, 以人参皂苷Rg₁色谱峰为参照峰(S), 计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积RSD值, 各共有峰相对保留时间RSD小于1%, 相对峰面积RSD小于5%, 表明仪器精密度良好。

2.3.4.2 重复性试验

取每服饮片量, 按照“2.3.2”项下制备得6份供试品溶液, 按照“2.3.1”项下色谱条件进样分析, 以人参皂苷Rg₁色谱峰为参照峰(S), 计算各特征峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积RSD值, 各共有峰相对保留时间RSD < 1%, 相对峰面积RSD < 5%, 表明重复性良好。

2.3.4.3 稳定性考察

取同一批供试品溶液, 同“2.3.1”项下色谱条件分别于0、4、8、12、16、24 h进样测定, 以人参皂苷Rg₁色谱峰为参照峰(S), 计算各共有峰与S峰的相对保留时间和相对峰面积RSD值, 各特征峰相对保留时间RSD < 1%, 相对峰面积RSD < 5%, 表明样品在24 h内稳定。

2.3.5 皂苷类成分指纹图谱的建立

按照“2.3.2”项的方法制备S1~S10供试品溶液, 按照“2.3.1”项下色谱条件, 进行HPLC-ELSD测定, 得到10批温经汤HPLC-ELSD指纹图谱。将10批温经汤基准样品HPLC-ELSD指纹图谱依次导入《中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)》软件, 以S5为参照图谱, 采用中位数法, 时间窗宽度为0.1, 进行多点校正, 标注8个共有峰, 并进行Mark峰匹配, 生成对照图谱并计算相似度, 10批HPLC-ELSD图谱的相似度均>0.950, 对照指纹图谱(R)、10批温经汤HPLC-ELSD叠加图谱(S1~S10)及对照品图谱见图 5~6。

图 5 温经汤对照指纹图谱(R)及10批温经汤ELSD叠加图谱(S1~S10)

Figure 5. HPLC reference fingerprint (R) and ELSD fingerprint of 10 batches of WJT (S1-S10)

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图 6 HPLC-ELSD对照品(Rg₁、Re、Rb₁)图及温经汤对照指纹图谱对比图

注: 2.人参皂苷Rg₁; 3.人参皂苷Re; 5.人参皂苷Rb₁

Figure 6. Comparison diagram of HPLC-ELSD of reference (Rg₁, Re, Rb₁) and WJT reference fingerprint

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2.3.6 温经汤参照峰的选择及相对保留时间的计算

综合10批温经汤基准样品保留时间结果, 确定了温经汤基准样品的鉴别标准, 建议煎液指纹图谱中应有8个共有峰, 并以保留时间及峰面积相对适中且相对稳定的人参皂苷Rg₁(2号峰)作为参照峰(S峰), 计算各共有峰与S峰的相对保留时间, 结果10批温经汤8个共有峰相对保留时间RSD值< 5%, 相对峰面积RSD值均 < 10%。

3. 讨论

本研究对建立的HPLC-UV指纹图谱色谱条件进行优化, 单因素考察了不同柱温(25、30、35 ℃), 不同流速(0.6、0.8、1.0 mL·min^-1), 不同进样量(10、20、30、40、50 μL), 不同流动相(乙腈-甲酸、乙腈-醋酸、乙腈-磷酸), 不同色谱柱[Agilent 5 TC-C₁₈(2)、Agilent SB-C₁₈、Kromasil 100-5-C₁₈、Hedera ODS-2]对洗脱效果的影响, 发现不同温度、不同进样量对图谱无较大影响, 流速为0.6 mL·min^-1, 色谱峰较宽, 随着流速的增大, 各共有峰保留时间前移, 流速为1.0 mL·min^-1, 部分色谱峰出现交叉, 分离度较差。不同色谱柱对图谱的出峰数目以及分离度有较大影响, 本研究所用Agilent 5 TC-C₁₈(2)色谱柱出峰数目多, 分离度好；Agilent SB-C₁₈色谱柱有较好的分离度, 但出峰数目较少；Kromasil 100-5-C₁₈色谱柱, 出峰数目少, 且部分峰出现拖尾；Hedera ODS-2色谱柱中峰19(藁本内酯)分离度较其他色谱柱好, 但甘草的相关共有峰出现交叉。根据出峰数目及分离效果, 色谱最佳条件：色谱柱为Agilent 5 TC-C₁₈(2), 乙腈-甲酸为流动相, 进行梯度洗脱, 柱温30 ℃，流速0.8 mL·min^-1，进样量10 μL。

通过单味药和缺阴性药供试品与复方供试品成分比对, 将HPLC-UV指纹图谱中19个共有峰进行归属, 共归属了除人参外的8味药材。因人参皂苷类成分与其它成分吸收波长存在较大差异, 无法在HPLC-UV指纹图谱得到归属, 针对人参皂苷类成分的末端吸收现象, 对基准样品进行萃取纯化, 建立HPLC-ELSD指纹图谱, 通过对照品指认出人参的主要成分人参皂苷Rg₁、人参皂苷Re和人参皂苷Rb₁。当前有关经典名方温经汤基准样品的相关研究^{[7-8, 21-22]}中, 尚未有通过指纹图谱指认出全方所有药味的明确报道。本研究建立的HPLC-UV和HPLC-ELSD指纹图谱, 首次归属了全方所有药味, 弥补了当前研究的空缺, 为后续温经汤基准样品、制剂的质量控制及量值传递研究提供参考。

图 1 温经汤正(A)、负(B)离子模式下的总离子流图

Figure 1. Total ion chromatogram of WJT in positive (A) and negative (B) ion modes

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图 2 温经汤对照指纹图谱(R)及10批温经汤叠加图谱(S1~S10)

Figure 2. Reference fingerprint (R) and fingerprint of 10 batches of WJT (S1-S10)

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图 3 HPLC-UV混合对照品图(C)及温经汤对照指纹图谱(S1)对比图

注: 1.没食子酸; 3.芍药苷; 4.β-蜕皮甾酮; 6.甘草苷; 7.阿魏酸; 13.桂皮醛; 15.丹皮酚; 16.甘草酸; 19.藁本内酯

Figure 3. Comparison diagram of HPLC-UV mixed reference (C) and WJT reference fingerprint (S1)

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图 4 单味药材共有峰归属

注: S1.全方; S2.牛膝; S3.莪术; S4.肉桂; S5.甘草; S6.川芎; S7.当归; S8.川芎和当归; S9.白芍; S10.牡丹皮; S11.白芍和牡丹皮; S12.人参

Figure 4. Common peak attribution of single medicine materials

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图 5 温经汤对照指纹图谱(R)及10批温经汤ELSD叠加图谱(S1~S10)

Figure 5. HPLC reference fingerprint (R) and ELSD fingerprint of 10 batches of WJT (S1-S10)

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图 6 HPLC-ELSD对照品(Rg₁、Re、Rb₁)图及温经汤对照指纹图谱对比图

注: 2.人参皂苷Rg₁; 3.人参皂苷Re; 5.人参皂苷Rb₁

Figure 6. Comparison diagram of HPLC-ELSD of reference (Rg₁, Re, Rb₁) and WJT reference fingerprint

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表 1 温经汤基准样品饮片来源及批号信息

Table 1 The origin and batch number of herbal pieces from WJT substance benchmarks

饮片	拉丁名	产地	批号
当归(酒)	Angelica sinensis(Oliv.) Diels	甘肃岷县	DG-191204、22012201、22012202、22012203、22012204、22012205
川芎	Ligusticum chuanxiong Hort.	四川彭州市四川眉山市	CX-200901、22022001、22022002、22022003、22022004、22022005
肉桂	Cinnamomum cassia Presl	广西平南县	RG-200901、22022401、22022402、22022403、22022404、22022405
白芍	Paeonia lactiflora Pall.	安徽亳州市	BS-191202、22022701、22022702、22022703、22022704、22022705
牡丹皮	Paeonia suffruticosa Andr.	安徽铜陵市安徽谯城区	MDP-201001、22022301、22022302、22022303、22022304、22022305
莪术(醋)	Curcuma phaeocaulis VaL.	云南红河州	EZ-201001、22030101、22030102、22030103、22030104、22030105
人参	Panax ginseng C. A. Mey.	吉林长白县	RS-200601、22030301、22030302、22030303、22030304、22030305
甘草(炒)	Glycyrrhiza uralensis Fisch.	甘肃岷县	GC-201001、22030501、22030502、22030503、22030504、22030505
牛膝(酒)	Achyranthes bidentata Bl.	河南武陟县	NX-190703、22030201、22030202、22030203、22030204、22030205
注: DG-191204、CX-200901、RG-200901、BS-191202、MDP-201001、EZ-201001、RS-200601、GC-201001、NX-190703批次饮片均购自安徽省万生中药饮片有限公司, 其余批次饮片均由实验室炮制。

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表 2 温经汤基准样品HPLC-Q-TOF-MS分析

Table 2 HPLC-Q-TOF-MS analysis results of WJT substance benchmarks

峰号	分子式	t_R/min	加合离子类型	m/z (理论值)	m/z (实测值)	误差/×10^-6	主要碎片离子	化合物	来源
1	C₁₈H₂₈O₉	3.28	[M-H]^-	387.166 1	387.168 9	7.4	341.112 1, 179.058 0, 161.047 0, 119.036 5, 101.025 6, 89.026 0	川芎苷A	CX
2	C₆H₁₃NO₂	3.46	[M+H]⁺	132.101 9	132.101 8	-0.6	132.103 0, 58.070 8	异亮氨酸	DG
3	C₆H₁₂O₆	3.55	[M-H]^-	179.056 1	179.056 4	1.7	179.057 7, 161.047 3, 141.022 7, 99.010 2	葡萄糖	RS
4	C₁₂H₂₂O₁₁	4.06 4.05	[M+H]⁺ [M-H]^-	343.123 5 341.108 9	343.123 9 341.108 0	1.1 -2.7	163.061 8, 145.050 2, 73.031 3 341.111 8, 179.057 1, 119.036 1, 101.025 6, 89.025 6, 71.015 9, 59.016 8	麦芽糖	RS
5	C₅H₅N₅	4.22	[M+H]⁺	136.061 8	136.061 5	-2.0	136.063 0, 119.037 2, 92.027 5	腺嘌呤	CX
6	C₆H₈O₇	6.71	[M-H]^-	191.019 7	191.019 7	-0.2	191.021 7, 129.019 9, 87.010 5	枸橼酸	RS
7	C₉H₁₂N₂O₆	7.19	[M-H]^-	243.062 3	243.062 2	-0.1	243.063 3, 200.058 2, 110.026 6	尿苷	GC
8	C₁₀H₁₃N₅O₄	7.63	[M+H]⁺	268.104 0	268.103 9	-0.6	136.062 6, 119.036 4	腺苷	RS
9	C₁₃H₁₆O₁₀	8.35	[M-H]^-	331.067 1	331.066 7	-1.0	331.071 0, 271.050 4, 211.027 2, 169.015 6, 151.004 3, 125.026 0	没食子酰葡萄糖	MDP
10	C₇H₆O₅	10.04 10.07	[M+H]⁺ [M-H]^-	171.028 8 169.014 3	171.028 6 169.014 7	-1.0 2.5	171.029 3, 153.019 9, 125.024 7, 107.014 6 169.017 1, 125.026 4, 124.018 7	没食子酸^*	MDP
11	C₇H₆O₄	14.39	[M-H]^-	153.019 3	153.019 6	1.8	153.021 1, 109.031 0, 91.020 6	原儿茶酸	GC
12	C₁₈H₂₄O₈	16.49	[M+H]⁺	369.154 4	369.152 7	-4.7	369.152 6	Celephthalide A	CX
13	C₂₃H₂₈O₁₂	17.00 17.02	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	514.191 9 495.150 8	514.192 4 495.147 7	1.0 -6.2	197.081 5, 179.070 5, 139.039 8 301.074 7, 191.036 9, 150.033 8, 121.031 0	氧化芍药苷	BS
14	C₁₆H₁₈O₉	17.67	[M+Na]⁺	377.084 3	377.084 4	0.2	377.084 6, 215.053 2	绿原酸	DG
15	C₇H₆O₃	17.72	[M-H]^-	137.024 4	137.024 7	2.0	137.025 9, 92.028 0	对羟基苯甲酸	MDP
16	C₁₅H₁₄O₆	18.06 18.09	[M+H]⁺ [M-H]^-	291.086 3 289.071 8	291.086 6 289.071 4	1.0 -1.2	207.066 0, 165.054 7, 139.039 7, 123.045 7, 111.045 8 289.075 6, 205.053 1, 179.037 7, 163.041 7, 149.026 8, 137.026 1, 125.026 4, 109.031 0	儿茶素	BS, MDP
17	C₈H₈O₅	18.36	[M-H]^-	183.029 9	183.030 1	0.9	183.031 6, 168.008 1, 140.012 6, 124.018 5	没食子酸甲酯	MDP
18	C₂₇H₃₀O₁₅	19.53 19.54	[M+H]⁺ [M-H]^-	595.165 8 593.151 2	595.165 8 593.148 3	0.5 -4.9	595.166 4, 577.1547, 559.144 2, 433.093 3, 283.054 7 593.156 8, 503.123 3, 473.115 8, 353.070 3	山柰酚-3-O-芸香糖苷	GC
19	C₇H₆O₂	19.79	[M-H]^-	121.029 5	121.030 1	4.6	121.033 1, 77.041 4	苯甲酸	BS, MDP
20	C₈H₆O₄	19.79	[M-H]^-	165.019 3	165.019 5	0.9	121.032 0, 77.042 2	邻苯二甲酸	DG
21	C₂₀H₂₈O₁₂	20.18	[M-H]^-	459.150 8	459.148 7	-4.5	459.153 4, 165.057 4, 147.044 1	牡丹酚原苷	MDP
22	C₈H₈O₄	20.20	[M-H]^-	167.035 0	167.035 4	2.7	167.038 5, 152.011 6, 123.047 1, 121.030 4	香荚兰酸	CX
23	C₉H₈O₄	20.44	[M-H]^-	179.035 0	179.035 3	1.5	179.038 2, 135.046 8, 134.039 1	咖啡酸	CX
24	C₂₁H₂₂O₁₁	20.95	[M-H]^-	449.108 9	449.106 3	-6.0	413.939 2, 160.843 0	二氢槲皮素-7-O-鼠李糖苷	GC
25	C₂₃H₂₈O₁₁	21.06	[M-H]^-	479.155 9	479.154 2	-3.5	479.156 5, 121.029 6, 77.988 0	芍药内酯苷	BS
26	C₂₃H₂₈O₁₁	21.06 22.24	[M+H]⁺ [M-H]^-	481.170 4 479.155 9	481.170 9 479.152 6	0.9 -6.9	319.118 4, 301.107 5, 197.081 6, 105.035 7 479.163 9, 449.147 6, 327.111 5, 165.057 5, 121.031 0, 77.041 7	芍药苷^*	BS
27	C₃₀H₃₂O₁₆	21.23 21.25	[M+Na]⁺ [M-H]^-	671.158 3 647.161 8	671.159 1 647.158 7	1.3 -4.8	503.153 9, 341.101 4 647.167 9, 629.155 8, 509.134 0, 491.125 7, 399.096 4, 313.058 8, 271.027 7, 211.027 7	没食子酰氧化芍药苷	BS, MDP
28	C₂₇H₂₄O₁₈	21.33 21.34	[M+Na]⁺ [M-H]^-	659.096 3 635.089 0	659.086 6 635.085 6	1.6 -5.3	659.087 1, 489.067 3 635.095 7, 483.082 8, 465.072 0, 313.059 9, 169.015 9, 125.024 9	1, 3, 6-三没食子酰葡萄糖	MDP
29	C₂₆H₂₈O₁₄	21.49 21.50	[M+H]⁺ [M-H]^-	565.155 2 563.140 6	565.155 6 563.137 3	0.7 -6.0	565.154 5, 547.143 3, 409.093 0, 309.080 0 563.145 6, 473.114 2, 443.102 6, 383.081 1	芹菜苷	GC
30	C₉H₁₀O₂	22.24	[M+H]⁺	151.075 4	151.074 9	-2.9	95.088 0, 81.035 0, 67.057 2	3-甲氧基-4-羟基苯乙烯	CX
31	C₁₀H₁₀O₃	22.24	[M+H]⁺	179.063 0	179.070 3	-0.8	179.071 6, 161.060 7, 133.066 6	松柏醛	RG
32	C₂₄H₃₀O₁₃	22.27	[M-H]^-	525.161 4	525.157 5	-7.4	525.166 4, 327.110 6, 165.057 1	牡丹皮苷E	MDP
33	C₂₇H₃₂O₁₄	23.17 22.58	[M+H]⁺ [M-H]^-	581.186 5 579.171 9	581.186 7 579.167 9	0.5 -7.0	581.186 2, 257.080 4 579.176 8, 255.068 5, 135.011 1, 119.051 6	柚皮苷	GC
34	C₂₁H₂₀O₉	23.31	[M+H]⁺	417.118 0	417.118 2	0.4	417.116 8, 255.065 1	异黄酮苷	GC
35	C₂₇H₃₀O₁₄	23.51 23.52	[M+H]⁺ [M-H]^-	579.170 8 577.156 3	579.170 6 577.152 6	-0.5 -6.3	579.170 6, 561.160 3, 543.152 1 577.160 4, 457.116 3, 413.088 8, 383.079 5	野漆树苷	MDP
36	C₃₄H₂₈O₂₂	23.89 23.91	[M+Na]⁺ [M-H]^-	811.096 4 787.100 0	811.097 2 787.095 8	0.9 -5.3	811.098 4, 641.077 5, 471.053 0, 301.032 5 787.108 0, 635.094 3, 617.084 3, 465.072 2, 169.016 0	1, 2, 3, 6-四没食子酰葡萄糖	MDP
37	C₂₇H₄₄O₇	24.19	[M+H]⁺	481.316 0	481.315 9	-0.1	481.313 9, 463.307 4, 445.296 3, 301.180 7	β-蜕皮甾酮^*	NX
38	C₂₇H₃₂O₁₆	24.35	[M-H]^-	611.161 8	611.157 9	-6.3	611.168 3, 445.103 4, 169.016 7, 165.057 1, 125.025 4	牡丹苷A/C	MDP
39	C₁₅H₁₂O₄	24.70	[M+H]⁺	257.080 8	257.080 9	0.2	257.080 8, 147.044 7, 137.023 8, 119.050 8	甘草素	GC
40	C₂₆H₃₀O₁₃	24.74	[M-H]^-	549.161 4	549.157 3	-7.5	549.165 8, 255.068 1, 135.010 1, 119.051 8	芹糖甘草苷	GC
41	C₁₅H₂₂O₄	25.00	[M+H]⁺	267.159 1	267.159 0	-0.3	249.149 1, 231.129 8, 69.071 7	Verrucarol	EZ
42	C₂₁H₂₂O₉	25.30 25.34	[M+H]⁺ [M-H]^-	419.133 7 417.119 1	419.134 2 417.116 6	1.3 -6.0	257.081 2, 239.070 4, 147.044 3, 137.024 2 417.122 1, 254.068 3, 135.010 3, 119.051 9, 91.021 0	甘草苷^*	GC
43	C₁₅H₁₂O₄	25.32	[M+H]⁺	257.080 8	257.080 7	-0.7	257.081 3, 147.044 3, 137.0241, 119.049 9, 91.056 4	乔松素	GC
44	C₄₁H₃₂O₂₆	25.78 25.80	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	958.152 0 939.110 9	958.153 2 939.105 1	1.2 -6.2	771.1031, 153.0190, 125.0241 939.120 5, 769.096 6, 617.085 0, 601.088 3, 169.016 2	五没食子酰葡萄糖	BS, MDP
45	C₃₀H₃₂O₁₅	25.81 25.84	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	650.208 0 631.166 8	650.207 6 631.162 6	-0.5 -6.7	493.135 3, 315.072 2, 297.062 8, 153.019 5, 127.041 4 297.078 8, 255.068 1	没食子酰芍药苷	BS, MDP
46	C₁₀H₁₀O₄	26.37 26.38	[M+H]⁺ [M-H]^-	195.065 2 193.050 6	195.065 1 193.050 6	-0.6 0.0	177.055 8, 149.060 0, 145.028 3, 134.036 5, 117.034 3 193.052 8, 178.029 4, 149.061 8, 134.038 8	阿魏酸^*	CX, DG
47	C₃₀H₃₂O₁₄	27.42 27.43	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	634.213 0 615.171 9	634.212 8 615.167 5	-0.4 -7.2	283.083 0, 265.072 5, 139.040 1, 121.027 5 615.178 0, 281.069 4, 137.026 8	牡丹皮苷H	MDP
48	C₂₁H₂₀O₁₀	28.85	[M+H]⁺	433.112 9	433.112 9	-0.1	271.060 2, 153.018 4	牡荆素	GC
49	C₁₅H₁₂O₅	29.16	[M+H]⁺	273.075 8	273.075 7	-0.4	273.077 7, 153.018 5, 147.045 0, 119.052 7, 69.034 7	柚皮素	GC
50	C₁₅H₁₀O₅	29.20	[M-H]^-	269.045 6	269.044 7	-3.3	269.047 2, 133.031 4	芹菜素	GC
51	C₂₄H₃₀O₁₂	29.43	[M-H]^-	509.166 5	509.162 5	-7.8	509.172 3, 341.128 1, 121.031 5, 77.039 8	牡丹皮苷D	MDP
52	C₁₆H₁₄O₆	29.59 29.60	[M+H]⁺ [M-H]^-	303.790 4 301.071 8	303.086 2 301.070 4	-0.2 -4.7	303.087 1, 261.075 9, 193.049 9, 178.026 9, 163.038 9, 150.031 8, 139.039 9, 137.024 1, 123.044 4 301.074 7, 286.051 4, 161.026 4, 150.033 8	橙皮素	GC
53	C₉H₁₆O₄	29.88	[M-H]^-	187.097 6	187.097 4	-1.1	187.098 5, 169.089 2, 125.098 5	壬二酸	DG
54	C₄₈H₈₂O₁₈	29.97	[M+Na]⁺	969.539 3	969.538 5	0.5	969.536 5	人参皂苷Re^*	RS
55	C₈H₈O₃	30.50	[M-H]^-	151.040 1	151.040 2	0.6	151.038 1, 135.009 9, 109.030 7, 91.020 6	香草醛	CX
56	C₂₂H₂₆O₁₁	30.93	[M+Na]⁺	489.136 7	489.138 4	3.5	285.076 5, 270.053 2	仙茅苷	GC
57	C₁₂H₁₄O₃	31.31	[M+H]⁺	207.101 6	207.101 3	-1.5	207.101 2, 189.090 9, 165.054 7, 123.044 1, 95.052 6, 67.058 1	4-羟基-3-丁基苯酞	CX
58	C₂₂H₂₂O₉	31.58	[M+H]⁺	431.133 7	431.133 3	-0.8	269.081 1, 254.058 1, 237.055 2	芒柄花苷	GC
59	C₃₀H₃₂O₁₃	31.80	[M+NH₄]⁺	618.218 1	618.217 9	-0.3	283.080 3, 265.070 6, 179.070 0, 139.038 9, 121.029 9	牡丹皮苷C	MDP
60	C₃₁H₃₄O₁₄	31.88	[M+NH₄]⁺	648.228 7	648.228 8	0.2	313.093 0, 295.082 5, 169.050 7, 151.039 8	牡丹皮苷J	MDP
61	C₁₅H₁₀O₄	32.82 32.83	[M+H]⁺ [M-H]^-	255.065 2 253.050 6	255.065 0 253.049 5	-0.9 -4.3	255.065 0, 145.028 8, 137.024 1 253.052 3, 135.009 5, 117.036 0, 91.019 8	7, 4′-二羟基黄酮	GC
62	C₃₀H₃₂O₁₃	33.17	[M+NH₄]⁺	618.218 1	618.216 6	-2.5	445.156 2, 317.103 3, 267.087 1, 249.076 9, 179.070 3, 105.035 6	苯甲酰氧化芍药苷	BS
63	C₁₆H₁₄O₅	33.84 33.86	[M+H]⁺ [M-H]^-	287.091 4 285.076 9	287.091 2 285.075 6	-0.6 -4.3	287.091 6, 245.081 3, 193.049 1, 150.032 0, 121.029 8 285.079 4, 270.055 6, 177.021 5, 150.033 8, 121.023 3	甘草查尔酮B	GC
64	C₁₆H₁₂O₆	35.06 35.06	[M+H]⁺ [M-H]^-	301.070 7 299.056 1	301.070 6 299.054 8	-0.2 -4.4	301.071 4, 273.104 7, 258.057 0, 139.041 9, 123.043 8 299.058 6, 284.035 6, 256.040 2	3-(2, 4-二羟基苯基)-7-羟基-5-甲氧基-2H-1-苯并吡喃-2-酮	GC
65	C₁₅H₁₂O₄	35.14	[M-H]^-	255.066 3	255.065 6	-2.8	255.067 8, 135.010 6, 119.051 8, 91.021 1	异甘草素	GC
66	C₁₆H₁₂O₅	35.81 35.83	[M+H]⁺ [M-H]^-	285.075 8 283.061 2	285.076 1 283.059 5	0.5 -5.9	285.075 8, 270.053 4, 269.043 2, 253.048 8, 213.055 5, 137.023 6 283.062 8, 268.038 8, 267.031 2, 239.036 8, 211.042 2	毛蕊异黄酮	GC
67	C₁₅H₁₀O₇	36.22	[M-H]^-	301.035 4	301.034 1	-4.2	301.037 8, 273.037 5, 151.005 6, 121.030 4, 107.016 2, 93.034 8	槲皮素	GC
68	C₄₂H₇₂O₁₄	37.62	[M-H]^-	799.484 9	499.478 0	-8.7	799.493 4, 637.438 5, 475.387 0	人参皂苷Rg₁^*	RS
69	C₃₀H₃₂O₁₂	37.69 37.70	[M+NH₄]⁺ [M-H]^-	602.223 2 583.182 1	602.222 4 583.177 5	-1.3 -7.8	445.152 0, 301.105 2, 267.086 8, 249.076 3, 179.071 2, 151.076 4, 105.035 9 583.185 3, 553.164 1, 431.144 9, 121.030 9	苯甲酰芍药苷	BS
70	C₅₄H₉₂O₂₃	38.18	[M+Na]⁺	1131.592 2	1131.589 9	-2.0	1 131.588 4, 365.104 9	人参皂苷Rb₁^*	RS
71	C₁₂H₁₂O₂	39.09	[M+H]⁺	189.091 0	189.091 0	0.1	189.094 0, 171.079 2, 161.057 4, 143.050 8, 105.035 9, 77.041 4	丁烯基苯酞	DG
72	C₄₁H₇₀O₁₂	39.11	[M+Na]⁺	777.476 0	777.476 1	0.2	777.474 8, 335.095 4	人参皂苷CY	RS
73	C₄₂H₇₂O₁₃	39.87	[M+Na]⁺	807.486 5	807.485 1	-1.7	807.487 2, 349.114 6	人参皂苷F₂	RS
74	C₁₆H₁₄O₄	39.99 40.01	[M+H]⁺ [M-H]^-	271.096 5 269.081 9	271.096 4 269.080 4	0.5 -5.9	271.094 7, 229.086 9, 177.054 5, 134.036 7, 121.029 4, 107.050 7, 93.035 7 269.084 1, 237.056 1, 175.041 9, 161.025 9, 133.031 1, 120.0226, 92.028 3	刺甘草查尔酮	GC
75	C₄₈H₇₆O₁₉	40.26	[M+Na]⁺	979.487 3	979.485 5	-1.9	979.485 3, 641.400 7	人参皂苷Ro	RS
76	C₉H₈O	40.94	[M+H]⁺	133.064 8	133.064 5	-2.1	133.068 4, 103.056 2, 77.042 2	桂皮醛^*	RG
77	C₁₅H₁₆O₃	41.02	[M+H]⁺	245.117 2	245.117 0	-0.8	245.117 3, 229.086 2, 225.089 7, 201.090 0, 169.063 4	Kwangsiensis A	EZ
78	C₁₆H₁₂O₅	41.23	[M-H]^-	283.061 2	283.059 5	-5.9	283.062 8, 268.038 9, 224.048 2, 135.010 3	樱黄素	GC
79	C₃₀H₄₆O₅	41.97	[M+H]⁺	487.341 8	487.340 7	-2.3	487.341 7, 317.210 4	24-羟基甘草次酸	GC
80	C₃₀H₄₄O₄	41.97	[M+H]⁺	491.313 2	491.311 8	-2.3	469.330 9, 451.321 1, 439.319 8, 235.168 8	光甘草内酯	GC
81	C₁₆H₁₂O₆	42.78 42.81	[M+H]⁺ [M-H]^-	301.070 7 299.056 1	301.070 8 299.053 4	0.5 -9.1	301.072 4, 286.046 5, 285.038 9, 258.052 7, 229.048 0, 136.016 2, 121.029 9 299.056 8, 284.034 5, 255.031 2, 227.036 7	金圣草(黄) 素	GC
82	C₅₅H₉₂O₂₃	43.01	[M+Na]⁺	1143.592 2	1143.590 8	-1.2	1 143.589 6, 831.487 5	人参皂苷Rs₂	RS
83	C₉H₁₀O₃	43.90	[M+H]⁺	167.070 3	167.070 1	-0.9	167.071 5, 149.061 3, 125.061 2, 121.066 8	丹皮酚^*	MDP
84	C₃₀H₄₆O₄	44.21	[M+H]⁺	471.346 9	471.346 5	-0.9	471.346 2, 317.211 6, 235.169 1	甘草次酸	GC
85	C₄₂H₆₂O₁₆	44.23	[M+H]⁺	823.411 1	823.410 1	-1.2	823.406 5, 647.377 6, 471.347 6, 453.335 4, 435.324 2, 407.329 5	甘草酸^*	GC
86	C₁₀H₁₀O₂	44.76	[M+H]⁺	163.075 4	163.075 2	-1.2	163.077 4, 135.079 8, 131.048 1, 107.051 0, 103.054 5, 77.042 0	邻甲氧基肉桂醛	RG
87	C₉H₁₀O	44.76	[M+H]⁺	135.073 2	135.080 3	-0.9	103.055 1, 77.042 3	肉桂醇	RG
88	C₁₂H₁₄O₃	44.87	[M-H]^-	205.087 0	205.085 7	-6.4	161.097 4, 119.947 3, 83.052 1	4-羟基-3-丁基苯酞	DG
89	C₁₆H₁₂O₄	45.03 45.04	[M+H]⁺ [M-H]^-	269.080 8 267.066 3	269.080 4 267.064 5	-1.6 -6.8	269.080 8, 254.056 2, 253.049 0, 237.054 0, 226.062 1 267.066 9, 252.043 8, 223.040 4, 135.009 1	刺芒柄花素	GC
90	C₁₂H₁₄O₃	47.03 47.06	[M+H]⁺ [M-H]^-	207.101 6 205.087 0	207.100 7 205.086 2	-4.2 -4.2	191.004 2, 151.038 7, 147.044 3, 105.035 2, 77.041 9 205.088 8, 161.098 8, 106.044 5	洋川芎内酯F	DG
91	C₁₆H₂₂O₄	48.69	[M+H]⁺	279.159 1	279.158 8	-1.0	279.160 7, 149.023 6, 121.030 1, 105.033 7, 79.054 1	邻苯二甲酸二丁酯	CX
92	C₁₆H₁₄O₄	49.36	[M+H]⁺	271.096 5	271.095 6	0.5	271.099 5, 161.060 8, 109.066 6	美迪紫檀素	GC
93	C₁₂H₁₂O₃	49.64	[M-H]^-	203.071 4	203.070 7	-3.4	203.073 2, 173.025 6, 160.017 9, 145.031 1	3-丁烯基-7-羟基苯酞	CX
94	C₂₀H₂₂O₆	51.91	[M-H]^-	357.134 4	357.130 8	-8.9	357.135 5, 232.075 0, 149.025 7, 109.031 4	松脂素	GC
95	C₂₀H₂₀O₆	52.58	[M-H]^-	355.118 7	355.115 5	-9.1	355.120 6, 229.088 4, 174.033 4, 83.015 7	阿魏酸松柏酯	DG
96	C₁₅H₂₀O	52.67	[M+H]⁺	217.158 7	217.158 1	-2.5	176.116 2, 162.099 3	莪术烯	EZ
97	C₁₅H₂₂O₂	52.69	[M+Na]⁺	257.151 2	257.151 0	-0.8	257.150 9	羟基雅槛蓝酮	EZ
98	C₂₀H₁₈O₇	53.59	[M-H]^-	369.098 0	369.094 7	-8.8	369.098 9, 300.029 8, 151.005 3, 107.017 7	乌拉尔醇	GC
99	C₁₂H₁₆O₂	53.61	[M+H]⁺	193.122 3	193.121 8	-2.9	193.121 6, 137.060 3, 77.042 3	洋川芎内酯A	CX
100	C₁₇H₁₄O₆	53.76	[M-H]^-	313.071 8	313.069 5	-7.2	313.073 0, 298.049 1, 283.026 2, 255.031 1	华良姜素	GC
101	C₂₀H₁₈O₆	54.23	[M+H]⁺	355.117 6	355.118 3	1.9	355.118 2, 337.106 6, 299.056 0, 243.064 2, 179.034 0, 151.039 8	甘草黄酮醇	GC
102	C₂₀H₂₀O₅	54.88 54.91	[M+H]⁺ [M-H]^-	341.138 4 339.122 2	341.137 6 339.120 8	-2.1 -8.8	341.136 0, 285.075 6, 272.068 9, 257.082 3 325.104 3, 282.050 0, 270.050 6, 254.054 1	鳞叶甘草素B	GC
103	C₁₅H₁₄O	55.06	[M+H]⁺	211.111 7	211.111 4	-1.5	211.110 6, 196.089 5, 195.079 5, 181.066 2, 152.062 2, 151.055 4	乌药薁	EZ
104	C₇H₆O₃	55.07	[M+H]⁺	139.039 0	139.038 6	-2.7	139.039 1, 121.029 1, 93.035 9	水杨酸	BS
105	C₂₀H₁₈O₆	55.69	[M+H]⁺	355.117 6	355.117 4	-0.6	355.118 2, 337.106 6, 229.085 9, 201.091 5, 189.091 0, 179.034 0, 153.018 7	甘草异黄烷酮	GC
106	C₂₁H₂₂O₄	56.08	[M+H]⁺	339.159 1	339.158 4	-2.0	339.159 6, 297.150 7, 271.096 9, 121.029 7, 93.036 2	甘草查尔酮A	GC
107	C₂₀H₁₈O₅	57.13	[M+H]⁺	339.122 7	339.122 5	-0.6	339.122 8, 283.060 5	黄羽扇豆魏特酮	GC
108	C₁₂H₁₄O₂	57.16	[M+H]⁺	191.106 7	191.105 2	-7.6	191.106 9, 161.060 5, 149.060 8, 79.057 6	正丁基苯酞	DG
109	C₂₀H₁₈O₅	57.34 57.36	[M+H]⁺ [M-H]^-	339.122 7 337.108 2	339.122 1 337.105 5	-1.9 -7.8	355.121 0, 299.060 8, 287.055 3, 271.060 9, 229.086 5, 69.074 6 337.110 1, 281.047 8, 145.030 5	鳞叶甘草素A	GC
110	C₁₅H₂₂O	58.13	[M+H]⁺	219.174 3	219.173 9	-2.0	176.119 3, 149.100 1, 133.067 3, 121.102 5, 119.087 1, 109.102 0, 105.070 4, 97.068 1	莪术酮	EZ
111	C₁₅H₂₄O₂	58.18	[M+H]⁺	237.184 9	237.184 2	-3.1	237.106 9, 107.087 5, 93.072 7	莪术二酮	EZ
112	C₁₂H₁₈O₂	58.57	[M+H]⁺	195.138 0	195.137 7	-1.4	81.073 4, 79.057 8	新蛇床内酯	CX
113	C₂₀H₂₀O₄	58.63	[M+H]⁺	325.143 4	325.143 1	-1.1	325.141 2, 149.060 2, 147.040 1, 121.192 8, 103.053 4, 77.041 8	光甘草宁	GC
114	C₁₂H₁₄O₂	59.21	[M+H]⁺	191.106 7	191.106 3	-1.9	191.106 6, 173.096 1, 145.100 9	Z-藁本内酯^*	CX, DG
115	C₂₀H₁₈O₆	59.46	[M+H]⁺	355.117 6	355.117 1	-1.5	355.120 3, 299.055 6, 121.030 3	甘草异黄酮A	GC
116	C₁₅H₂₀O	60.04	[M+H]⁺	217.158 7	217.158 5	-0.9	217.158 9, 202.137 5, 189.127 4, 175.112 9, 161.096 0, 149.096 7, 135.082 1, 119.086 7, 109.102 1	呋喃二烯	EZ
117	C₉H₈O₂	60.07	[M+H]⁺	149.059 7	149.059 2	-3.6	149.062 3, 121.032 5	肉桂酸	RG
118	C₁₅H₁₈O₂	60.10	[M+H]⁺	231.138 0	231.137 6	-1.8	231.138 1, 175.077 1, 173.096 2, 163.073 5, 161.060 0, 147.080 9, 135.081 4, 119.086 5, 105.071 2, 83.087 7	表莪术烯酮	EZ
119	C₂₀H₁₆O₅	60.42 60.43	[M+H]⁺ [M-H]^-	337.107 1 335.092 5	337.106 8 335.089 4	-0.9 -9.3	337.106 4, 319.096 2, 295.058 0 335.094 0, 320.069 0, 319.063 5, 317.082 1, 305.045 4	光甘草酮	GC
120	C₂₅H₂₆O₆	61.19	[M+H]⁺	423.180 2	423.178 9	-3.2	423.180 6, 367.117 4, 311.057 4, 299.054 0	粗毛甘草素A	GC
121	C₂₅H₃₂O₅	62.38	[M+H]⁺	413.232 3	413.231 7	-1.4	191.106 4, 149.060 2, 135.043 6	Wallichilide	CX
122	C₂₄H₂₈O₄	62.62	[M+H]⁺	381.206 0	381.205 8	-0.8	191.106 8, 149.060 0, 135.044 6	欧当归内酯A	DG
注: CX、DG、NX、EZ、GC、RG、RS、BS、MDP为川芎、当归、牛膝、莪术、甘草、肉桂、人参、白芍和牡丹皮; ^*表示化合物10、26、37、42、46、54、68、70、76、83、85、114在图谱中均有较高的峰, 且与对照品在图谱的相应位置出峰。

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表 3 10批温经汤基准样品HPLC-UV指纹图谱相似度

Table 3 Similarity of fingerprint of 10 batches of WJT substance benchmarks

批号	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	对照
S1	1.000	0.979	0.994	0.994	0.984	0.963	0.987	0.972	0.991	0.966	0.989
S2	0.979	1.000	0.991	0.990	0.995	0.995	0.990	0.996	0.990	0.993	0.997
S3	0.994	0.991	1.000	0.998	0.992	0.980	0.994	0.987	0.996	0.983	0.997
S4	0.994	0.990	0.998	1.000	0.994	0.980	0.993	0.986	0.996	0.983	0.997
S5	0.984	0.995	0.992	0.994	1.000	0.990	0.988	0.992	0.990	0.989	0.996
S6	0.963	0.995	0.980	0.980	0.990	1.000	0.987	0.994	0.984	0.992	0.991
S7	0.987	0.990	0.994	0.993	0.988	0.987	1.000	0.989	0.999	0.986	0.997
S8	0.972	0.996	0.987	0.986	0.992	0.994	0.989	1.000	0.988	0.999	0.995
S9	0.991	0.990	0.996	0.996	0.990	0.984	0.999	0.988	1.000	0.986	0.998
S10	0.966	0.993	0.983	0.983	0.989	0.992	0.986	0.999	0.986	1.000	0.992
对照	0.989	0.997	0.997	0.997	0.996	0.991	0.997	0.995	0.998	0.992	1.000

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表 4 10批温经汤基准样品共有峰相对保留时间

Table 4 Relative shift of retention time of characteristic peaks in transfer among 10 batches of WJT

峰号	S1	S2	S3	S4	S5	S6	S7	S8	S9	S10	RSD/%
1	0.387	0.387	0.387	0.386	0.390	0.388	0.388	0.387	0.387	0.386	0.28
2	0.655	0.655	0.655	0.655	0.658	0.655	0.655	0.655	0.654	0.655	0.15
3	0.850	0.850	0.849	0.848	0.850	0.848	0.848	0.849	0.849	0.849	0.07
4	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.927	0.926	0.04
5	0.940	0.940	0.942	0.941	0.940	0.939	0.941	0.940	0.941	0.939	0.08
6	0.962	0.962	0.963	0.962	0.962	0.962	0.962	0.962	0.962	0.962	0.02
7	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	1.000	0.00
8	1.149	1.150	1.149	1.150	1.148	1.151	1.150	1.151	1.150	1.151	0.08
9	1.198	1.197	1.198	1.198	1.195	1.198	1.199	1.198	1.198	1.198	0.08
10	1.381	1.381	1.382	1.384	1.376	1.382	1.382	1.382	1.381	1.383	0.15
11	1.465	1.464	1.465	1.467	1.459	1.465	1.465	1.465	1.465	1.467	0.16
12	1.478	1.479	1.479	1.481	1.472	1.478	1.479	1.479	1.478	1.481	0.16
13	1.539	1.538	1.539	1.539	1.533	1.538	1.538	1.539	1.538	1.540	0.12
14	1.591	1.591	1.592	1.595	1.584	1.591	1.590	1.591	1.591	1.593	0.17
15	1.649	1.648	1.648	1.649	1.642	1.648	1.648	1.649	1.648	1.650	0.13
16	1.675	1.675	1.675	1.679	1.667	1.675	1.674	1.675	1.674	1.676	0.17
17	1.763	1.763	1.763	1.767	1.754	1.763	1.762	1.763	1.762	1.764	0.18
18	1.981	1.981	1.981	1.981	1.972	1.980	1.980	1.980	1.980	1.982	0.15
19	2.226	2.225	2.225	2.224	2.213	2.224	2.223	2.223	2.224	2.226	0.17

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[22]	吴革林, 滕菲, 李祥溦, 等. 温经汤物质基准多指标成分含量测定及量值传递研究[J]. 中国中药杂志, 2021, 46(19): 5005-5014. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGZY202119016.htm WU GL, TENG F, LI XW, et al. Study on determination and quantity transfer of multi index components in Wenjing Decoction[J]. China J Chin Mater Med, 2021, 46(19): 5005-5014. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGZY202119016.htm

施引文献(3)

期刊类型引用(3)

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2.	华杰，刘洋，吴建明，孔晓霞，丁京伟，纪晓燕，朱婷. 温经汤物质基准高效液相色谱指纹图谱研究. 中国药业. 2024(22): 99-102 . 百度学术
3.	龚春霞，蒋叶坷，潘凌宇，孙叶红，韩燕全，汪电雷，汪永忠. 基于UPLC-QE-MS技术分析甘姜苓术配方颗粒的化学成分. 现代中药研究与实践. 2023(06): 44-50 . 百度学术

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图(6) / 表(4)

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1. 材料
1.1 仪器与试药
1.2 药材
2. 方法与结果
2.1 HPLC-Q-TOF/MS成分分析
2.1.1 色谱条件
2.1.2 质谱条件
2.1.3 供试品溶液的制备
2.1.4 温经汤基准样品化学成分分析
2.2 温经汤指纹图谱的建立
2.2.1 色谱条件
2.2.2 供试品溶液的制备
2.2.3 对照品溶液的制备
2.2.4 各单味药及阴性供试品的制备
2.2.5 方法学考察
2.2.5.1 精密度试验
2.2.5.2 重复性试验
2.2.5.3 稳定性考察
2.2.6 温经汤基准样品指纹图谱相似度评价
2.2.7 温经汤指纹图谱峰指认及峰归属
2.2.8 温经汤参照峰的选择及相对保留时间的计算
2.3 皂苷类成分的指纹图谱研究
2.3.1 色谱条件
2.3.2 供试品溶液的制备
2.3.3 对照品溶液的制备
2.3.4 方法学考察
2.3.4.1 精密度试验
2.3.4.2 重复性试验
2.3.4.3 稳定性考察
2.3.5 皂苷类成分指纹图谱的建立
2.3.6 温经汤参照峰的选择及相对保留时间的计算
3. 讨论

1. 材料
1.1 仪器与试药
1.2 药材
2. 方法与结果
2.1 HPLC-Q-TOF/MS成分分析
2.1.1 色谱条件
2.1.2 质谱条件
2.1.3 供试品溶液的制备
2.1.4 温经汤基准样品化学成分分析
2.2 温经汤指纹图谱的建立
2.2.1 色谱条件
2.2.2 供试品溶液的制备
2.2.3 对照品溶液的制备
2.2.4 各单味药及阴性供试品的制备
2.2.5 方法学考察
2.2.5.1 精密度试验
2.2.5.2 重复性试验
2.2.5.3 稳定性考察
2.2.6 温经汤基准样品指纹图谱相似度评价
2.2.7 温经汤指纹图谱峰指认及峰归属
2.2.8 温经汤参照峰的选择及相对保留时间的计算
2.3 皂苷类成分的指纹图谱研究
2.3.1 色谱条件
2.3.2 供试品溶液的制备
2.3.3 对照品溶液的制备
2.3.4 方法学考察
2.3.4.1 精密度试验
2.3.4.2 重复性试验
2.3.4.3 稳定性考察
2.3.5 皂苷类成分指纹图谱的建立
2.3.6 温经汤参照峰的选择及相对保留时间的计算
3. 讨论

参考文献(22)

施引文献

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经典名方温经汤基准样品HPLC-Q-TOF/MS分析与指纹图谱研究

作者简介: 汤志锋, 男, 硕士研究生, E-mail: 20200839@njucm.edu.cn

通讯作者: 黄仕文, 男, 副教授, 主要从事中药新剂型新技术及其产品开发研究, E-mail: hshw_66@163.com 程建明, 男, 研究员, 主要从事中药新剂型新技术及其产品开发研究, E-mail: cjm@njucm.edu.cn

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